氢化物原子荧光光谱法测定植物硒盐中硒含量的运用（一）

硒是介于金属与非金属之间的化学元素，硒在地壳中的含量非常稀少。世界卫生组（WTO）公布，硒是人体必需的14种微量元素之一，参与机体的抗氧化，硒缺乏是克山病发病的重要危险因素。全世界有四十多个国家和地区属于缺硒地区。我国是一个缺硒大国，据《中华人民共和国地方疾病与环境因素图集》揭示，从东北三省起斜穿至云贵高原，占我国国土面积的72%地区存在一条低硒地带，其中30%为严重缺硒地区。2012年因GB 14880-2012《食品安全国家标准食品营养强化剂使用标准》的颁布于实施，添加亚硒酸钠等无机硒的硒盐逐步退出市场，而国内部分制盐企业已开始利用植物源有机硒开展植物硒盐的研究、开发、生产，并上市销售。

2012年前食盐中测定无机硒含量的方法一般采用荧光光度法，如DB41/T271-2001《硒盐》中的二氨基联苯胺分光光度法以及GB/T 5009.93-2003《食品中硒的测定》中的2,3-二氨基萘荧光法，这两种方法取样量大，分析周期长，消耗试剂多，且采用有机溶剂甲苯或环己烷萃取，有污染，对人体危害大，操作也繁琐。GB 5009.93-2017《食品安全国家标准食品中硒含量的测定》第一法氢化物原子荧光光谱法适用于测定各类食品中的硒含量，而该方法适用范围广，实验参数或操作需根据被测物做相应细化研究。随着植物源有机硒引入食盐中，无机硒的测定方法已不适用于测定植物硒盐中硒含量，本实验在GB 5009.93-2017《食品安全国家标准食品中硒含量的测定》第一法氢化物原子荧光光谱法基础上进一步细化实验参数或操作，以求采用氢化物原子荧光光谱法精准测定植物硒盐中硒含量。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

AFS-230E双道原子荧光光度计（北京海光仪器有限公司）、硒空心阴极灯（北京海光仪器有限公司）、电加热板（北京莱伯泰科仪器股份有限公司），所有玻璃器皿及聚四氟乙烯消毒内罐先用去污剂洗净再用硝酸溶液（1+5）浸泡过夜，使用前用超纯水（UP水）冲洗干净，干燥，备用。

试剂除特别注明外均为分析纯，水为超纯水，盐酸优级纯，硒标准溶液100μg/m L（中国计量科学研究院），植物硒盐（重庆某某制盐化工有限公司）。

硒标准中间液（5μg/m L）：准确吸取5.0m L硒标准溶液于100m L容量瓶中，用（5+95）盐酸溶液稀释至刻度，摇匀，备用。

硒标准使用液（250μg/m L）：准确吸取5.0m L硒标准溶液于100m L容量瓶中，用（5+95）盐酸溶液稀释至刻度，摇匀，备用。

硝酸-高氯酸混合酸（9+1）：将900m L硝酸与100m L高氯酸混匀。

氢氧化钠溶液（5g/L）：称取5g氢氧化钠，溶于1000m L水中，混匀。

硼氢化钾溶液（20g/L），称取20g硼氢化钾，溶于1 L0.5%的氢氧化钠溶液中，混匀。

盐酸溶液（6mol/L）：量取50m L盐酸，缓慢加入40m L水中，冷却后用水定容至100m L，混匀。

铁氰化钾溶液（100g/L）:称取10g铁氰化钾，溶于100m L水中，混匀。

盐酸溶液（5+95），量取25m L优级纯浓盐酸，缓慢注入到475m L水中，混匀。

1.2 原子荧光光度计仪器参数

负高压260V，灯电流70m A，原子化温度800℃；炉高8mm，载气流速500m L/min，屏蔽气流速1000m L/min，延迟时间1s，读数时间14s，加液时间8s，进样体积2m L。测量方法为标准曲线法，读数方式为荧光强度值。

1.3 操作步骤

1.3.1 标准曲线的绘制

分别准确吸取硒标准使用液0.00m L、1m L、2m L、3m L、4m L、5m L、6m L于25m L比色管中，加适量水，分别加入2.0m L浓盐酸，1.0m L铁氰化钾溶液（100g/L），用水稀释至刻度，摇匀，待测。此硒标准系列溶液的质量浓度分别为0μg/L、10μg/L、20μg/L、30μg/L、40μg/L、50μg/L按1.2仪器工作参数上机测量。

以硼氢化钾溶液（20g/L）为还原剂，盐酸溶液（5+95）为载流，连续用标准系列的零管进样，待读数稳定之后，将硒标准系列溶液按质量浓度由低到高的顺序分别导入仪器，测定其荧光强度，以质量浓度为横坐标，荧光强度为纵坐标，制作标准曲线。

1.3.2 样品处理、测定与计算

称取样品2g左右（精确到0.001g）于100m L锥形瓶中，加入10m L超纯水，再加入20m L硝酸-高氯酸混合酸（9+1）及几粒玻璃珠，混合均匀，于锥形瓶颈部加上小漏斗，于200℃～250℃加热板上消解至8～10m L溶液，加入5m L盐酸溶液（6mol/L），继续加热至溶液变为清亮无色并伴有白烟出现，冷却，转移至25m L比色管中，加入2.0m L浓盐酸，1.0m L铁氰化钾（100g/L），用水定容，混匀待测。同时做试剂空白试验。按1.2仪器工作参数上机测量，在与测定标准系列溶液相同的实验条件下，将空白溶液和试样溶液分别导入仪器，测其荧光值强度，与标准系列比较定量。

植物硒盐中硒含量按式（1）计算：

式中：

X—植物硒盐中硒的含量，单位为毫克每千克（mg/kg);

ρ—植物硒盐溶液中硒的质量浓度，单位为微克每升（μg/L);

ρ0—空白溶液中硒的质量浓度，单位为微克每升（μg/L);

V—植物硒盐消化液总体积，单位为毫升（m L);

m—植物硒盐称样量，单位为克（g);

1000—换算系数。

2 结果与讨论

2.1 以重庆某某制盐化工有限公司生产的同一批次号的同一袋植物硒盐作为测试样品，按上述方法测定4个不同位点的硒含量，检测结果如下：

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