浅谈真假花青素快速检测试纸的制作方法及其检测方法（二）

1.3.5.2 不含酒精的液态样品处理

称取液态样品10g。加入10mL水。将制备好的试纸条浸润在上清液中，保持30s后取出观察显色变化。

1.3.5.3 含酒精的液态样品处理

称取液态样品10g。水浴加热除去酒精，加入10mL水，将制备好的试纸条浸润在上清液中，保持30s后取出观察显色变化。

1.3.6 现象及结果判定

若试纸呈现深红色，可认为样品中含有大量的人工合成色素或染料，极少量或者不含有天然花青素；若试纸呈现粉红色，淡红色或玫红色，认为样品中含有天然花青素外，仍然含有一定量的人工合成的色素或染料；若试纸呈现白色或者微蓝色，认为样品中含有天然花青素，并且不含有人工合成色素和染料。结果如图1所示。

2 结果与讨论

2.1 快速检测试纸对花青素及人工合成色素、染料的吸附特性的研究

2.1.1 花青素浓度对试纸吸附性质的影响

称取天然黑枸杞样品50g，加水100mL，振摇提取10min后超声提取10min，静置，得到上层紫红色清液，检测上清液中花青素含量为5mg/mL。检测上清液中不含有人工合成色素及染料。将上清液用水分别稀释成含花青素5mg/mL、2mg/mL、1mg/mL、0.5mg/mL、0.1mg/mL、0.05mg/mL、0.01mg/mL的溶液。分别用快速检测试纸吸附七种溶液中的花青素，观察现象。用1mL甲醇将试纸上离子液体洗脱到1mL离心管中，摇匀，进入液相色谱检测其花青色含量。具体现象，检测结果及分析，见表1所示。

结果表明，当样品液中花青素浓度在0.01～5mg/mL时，快速检测试纸对花青素不产生有效吸附。

2.1.2 人工合成色素浓度对试纸吸附性质的影响

以葡萄紫红色色素食用添加剂为溶质，以0.5mg/mL的花青素溶液为溶剂，分别配制体积浓度为5%、2%、1%、0.5%、0.1%、0.05%、0.01%的葡萄紫红色色素（其中含有赤藓红）食用添加剂溶液，分别用快速检测试纸吸附七种溶液中的花青素及人工合成色素，观察现象。用1mL甲醇将试纸上离子液体洗脱到1mL离心管中，摇匀，进入液相色谱检测其花青色及其红色色素含量。具体现象，检测结果及分析，见表2、图2所示。

结果表明，当样品液中同时含有人工合成色素及花青素时，快速检测试纸仅对色素进行有效吸附，且当色素浓度在一定范围内，色素浓度越高，试纸吸附色素越多，颜色越深。当试纸吸附色素浓度到达110μg/mL时，固载在试纸上的混合离子液体对色素的吸附到达饱和，随色素浓度增加，颜色不在变深。

产生称取天然黑枸杞样品50g，加水100mL，振摇提取10min后超声提取10min，静置，得到上层紫红色清液，检测上清液中花青素含量为5mg/mL。检测上清液中不含有人工合成色素及染料。将上清液用水分别稀释成含花青素5mg/mL、2mg/mL、1mg/mL、0.5mg/mL、0.1mg/mL、0.05mg/mL、0.01mg/mL的溶液。分别用快速检测试纸吸附七种溶液中的花青素，观察现象。用1mL甲醇将试纸上离子液体洗脱到1mL离心管中，摇匀，进入液相色谱检测其花青色含量。以葡萄紫红色色素食用添加剂为溶质，以0.5mg/mL的花青素溶液为溶剂，分别配制体积浓度为5%、2%、1%、0.5%、0.1%、0.05%、0.01%的葡萄紫红色色素（其中含有赤藓红）食用添加剂溶液，分别用快速检测试纸吸附七种溶液中的花青素及人工合成色素，观察现象。用1mL甲醇将试纸上离子液体洗脱到1mL离心管中，摇匀，进入液相色谱检测其花青色及其红色色素含量。实验现象的原因主要是离子液体的结构可设计性，疏水性，快速且高效的吸附性和稳定性。天然花青素含有黄酮结构，和配体糖基化结构，黄酮的共轭结构被糖基化结构覆盖，黄酮原有弱共轭结构消失。而人工合成色素含有偶氮苯类，或者偶氮萘环类结构，在一般情况下表现出一定的共轭性质和结构。所以设计合成了与目标物结构相似的疏水性离子液体1-苄基-3-乙基萘并咪唑六氟磷酸盐，该离子液体对人工合成色素和染料有良好的吸附作用。但是该离子液体常温为固体，不能被应用到液-液吸附过程中，所以选用吸附性一般的疏水离子液体1-辛基-3-甲基咪唑六氟磷酸盐作为1-苄基-3-乙基苯并咪唑六氟磷酸盐的载体，两种离子液体按照比例混合后呈现透明黏稠液体状。而该混合型离子液体与天然花青素结构差别很大，所以该混合离子液体对天然花青素吸附性极差，在常温常压下基本不产生吸附。将混合后离子液体涂覆在玻璃纤维滤纸上，可以减少离子液体用量，节约成本；同时增加离子液体与样液的接触面积，加快吸附速度，达到快速鉴别的目的。

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