浅谈真假花青素快速检测试纸的制作方法及其检测方法（三）

2.1.3 样品液pH对试纸吸附性质的影响

分别用0.05mol/LpH为2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0、11.0的乙酸铵缓冲液，配制0.5mg/mL的花青素和0.5%葡萄籽红红色人工合成色素溶液，分别用快速检测试纸吸附七种溶液中的花青素及人工合成色素，观察现象，检测结果及分析，见表3所示。

由表3可知，样品液pH范围在4.0～9.0时，该快速检测试纸可以良好的吸附样品液中的人工合成色素，且不吸附花青素。是该试纸的最佳使用pH范围。当样品液pH≥10.0或pH≤3.0时，试纸虽然不吸附花青素，但是对人工合成色素吸附性减弱。

2.2 快速检测试纸性能参数

2.2.1 检测下限

取50组黑枸杞样品，按照1.3.5方法提取样品液中色素，用2mL甲醇将试纸上离子液体洗脱到比色皿中，得到50组待测液体，于紫外分光光度计540nm下分别测定50组液体吸光度，计算50组吸光度相对标准偏差为s=0.041，10倍相对标准偏差（n=50份）对应的浓度为本方法检测下限。10倍相对标准偏差对应浓度为2.4μg/mL。本方法处理样品为20倍稀释，计算得出本方法样品检出限为50μg/g。

2.2.2 假阳性率

称取固态样品5.0g，加入20mL蒸馏水，沸水浴提取10min，冷却至室温，吸取提取液2mL，加入蒸馏水10mL，得到有颜色且透明的样品液，将试纸条一端浸润在样品液中，保持30s后取出观察显色变化。称取液态样品10g。加入10mL水。将制备好的试纸条浸润在上清液中，保持30s后取出观察显色变化。称取液态样品10g。水浴加热除去酒精，加入10mL水，将制备好的试纸条浸润在上清液中，保持30s后取出观察显色变化。处理一批次（n=100份）阴性样品中，其中得到阳性结果为假阳性，假阳性率=假阳性数/100份。处理100份液相色谱确证无色素阴性黑枸杞样品后，得到2张试纸出现淡红色，其他试纸不显色。假阳性个数为2，假阳性率为2%。

2.2.3 假阴性率

称取固态样品5.0g，加入20mL蒸馏水，沸水浴提取10min，冷却至室温，吸取提取液2mL，加入蒸馏水10mL，得到有颜色且透明的样品液，将试纸条一端浸润在样品液中，保持30s后取出观察显色变化。称取液态样品10g。加入10mL水。将制备好的试纸条浸润在上清液中，保持30s后取出观察显色变化。称取液态样品10g。水浴加热除去酒精，加入10mL水，将制备好的试纸条浸润在上清液中，保持30s后取出观察显色变化。方法处理一批次（n=100份）阳性样品中，其中得到阴性结果为假阴性，假阴性率=假阴性数/100份。处理100份液相色谱确证含有色素阳性黑枸杞样品后，得到3张试纸不显色，其他试纸出现粉红色。假阴性个数为3，假阴性率为3%。

2.2.4 准确性

称取固态样品5.0g，加入20mL蒸馏水，沸水浴提取10min，冷却至室温，吸取提取液2mL，加入蒸馏水10mL，得到有颜色且透明的样品液，将试纸条一端浸润在样品液中，保持30s后取出观察显色变化。称取液态样品10g。加入10mL水。将制备好的试纸条浸润在上清液中，保持30s后取出观察显色变化。称取液态样品10g。水浴加热除去酒精，加入10mL水，将制备好的试纸条浸润在上清液中，保持30s后取出观察显色变化，处理一批次（n=100份）阴性样品和一批次（n=100份）阳性样品中，其中得到阴性结果为真阴性，阳性结果为真阳性，准确性=（真阳性+真阴性）/200份。处理100份液相色谱确证含有色素阳性黑枸杞样品和液相色谱确证无色素阴性黑枸杞样品后，得到真阳性结果97个，真阴性结果95个，准确性为96%。

2.3 实际样品检测

从甘肃省兰州市各个超市、农贸市场、小摊贩等场所，随机抽取黑枸杞样品4份，黑米样品4份，葡萄汁样品4份，黑枸杞饮料及保健品4份，葡萄酒样品4份，称取固态样品5.0g，加入20mL蒸馏水，沸水浴提取10min，冷却至室温，吸取提取液2mL，加入蒸馏水10mL，得到有颜色且透明的样品液，将试纸条一端浸润在样品液中，保持30s后取出观察显色变化。称取液态样品10g。加入10mL水。将制备好的试纸条浸润在上清液中，保持30s后取出观察显色变化。称取液态样品10g。水浴加热除去酒精，加入10mL水，将制备好的试纸条浸润在上清液中，保持30s后取出观察显色变化，使用快速检测试纸，鉴别上述样品中是否含有人工添合成色素。结合高效液相色谱，检测样品中花青素含量和人工合成色素含量。对比并分析快速检测试纸与高效液相色谱检测结果。具体结果见表4所示。

由表3可知花青素真伪快速检测试纸的检测结果，与液相色谱检测结果相吻合。

2.4 保存条件实验

取120份快速检测试纸，分为6组，每组20份。分别置于6种不同的条件下，放置6个月，在此对5组试纸的检测效果进行评价。具体结果见表5所示。

有表5证明，该快速检测试纸在零下20℃-常温下都可以在空气中保存6个月。这是由于离子液体具有很强的物理及化学稳定性。固相载体玻璃纤维滤纸同样属于不变质、腐败的材料。

3 结论

本发明试纸条制造成本低，在弱酸性、中性及弱碱性环境中对人工合成色素和染料吸附性强，对天然花青素不产生吸附。该试纸条能快速有效的从样品水溶液中吸附人工合成色素及染料而显色，而不吸附花青素，不显色。根据试纸的特殊性质可以区别含花青素的样品中，是否含有人工添加的色素和染料。成本试纸廉价，方便，快捷，操作简单，现象明显。适合非专业人员及现场执法人员使用。适用于食品中花青素定性快速检测试验。

该方法操作简单，吸附速度快，检测耗时短，现象明显，成本极低。适合任何环境下，不借助其他仪器设备的情况下，快速定性判定样品中花青素的真假。由于混合离子液体具有耐高温，结构性质稳定，沸点极高，蒸汽压几乎为零的特点，涂覆在玻璃纤维滤纸上的混合离子液体不易挥发，不易散失，可以在无需隔绝空气情况下，长时间常温常压下保存很长时间。

声明：本文所用图片、文字来源《中国食品添加剂》，版权归原作者所有。如涉及作品内容、版权等问题，请与本网联系

相关链接：乙酸铵，花青素，紫外分光光度计