液相色谱-串联质谱法测定乳制品中四种常用香料（三）

2.3 线性范围和定量限

将混合标准溶液配制成系列标准溶液，（浓度范围为2～100ng/mL），在本方法所确定的实验条件下进行分析，以定量离子峰面积为纵坐标，标准工作液浓度为横坐标作图建立标准曲线，四种化合物线性方程见表3，结果表明四种化合物在2～100ng/mL范围内线性决定系数均大于0.995。根据3倍信噪比，并计入试样量和定容体积，计算检出限，定量限则根据10倍信噪比计算，结果见表3，从表中可以看出乳粉等固体样品中麦芽酚和乙基香兰素定量限为2μg/kg，乙基麦芽酚定量限为4μg/kg，香兰素定量限为8μg/kg，均低于10μg/kg。

2.4 基质效应

采用液质联用分析复杂基质时通常存在基质效应，基质效应对检测结果有重要影响，因此需要考察本方法的基质效应。本实验以阴性的8种基质按照方法分别进行提取净化，用得到的净化液配制50ng/mL的标准品，每种做3个平行，将得到的响应值的平均值和纯溶剂配制的50ng/mL混合标准品的响应值进行比较，通过二者比值来评价基质效应，得出目标化合物在8种基质中的基质效应。四种化合物在各种乳制品中的基质效应在80%～100%的范围内，具体结果见表4。说明乳制品基质对四种化合物存在微弱的基质抑制效应，实际检测过程中可采用溶剂配制曲线直接定量。本方法基质效应低于水体系提取固相萃取柱净化方法，说明前处理取得了很好的净化效果。这主要是因为加入大量的硫酸钠形成盐析使蛋白质沉淀，通过碱液反萃可有效去除脂肪等不溶于碱性水溶液的有机化合物杂质，从而显著降低基质效应，有助于更准确的定量。

2.5 加标回收实验

在上述确定的色谱条件和前处理条件下，在未标注添加食用香精的不同基质中添加三个不同浓度水平的香料进行添加回收实验，其平均回收率与精密度见表5，从表中可以看出，四种化合物在各基质中三种浓度水平下，相对标准偏差在2.5%～11.9%，除炼奶和黄油外，其它基质中平均回收率在80.4%～104.8%之间，加标回收率和精密度均符合GB/T27404-200的要求，整个结果表明本方法检测稳定性较好。炼奶和黄油的回收率相对偏低，平均回收率在67.7%～84%之间，可能是由于炼奶基质较为粘稠，提取效率低，而黄油在加热溶解过程中易造成目标物的损失，此两种乳制品中四种香料化合物的测定应采用基质标准溶液进行校正。

2.6 与其它方法的比较

针对奶粉中四种香料化合物的检测，将所建立的方法与文献报道中的方法进行比较（表6），结果表明，此方法具有灵敏度高（检出限为0.6～2.4μg·kg^-1），分析时间短，基质效应小等优点。

2.7 实际样品分析

应用该方法对市售15件乳制品样品（4份样品标注添加食用香精，1份奶粉样品标注添加香兰素）进行分析测定。检测结果见表7，由结果可知，标注添加食用香精样品确实检出了四种香料中的一种或多种，说明了此四种化合物在乳制品中的应用较为广泛。需要注意的是，GB2760-2014规定发酵乳不得添加食用香精香料，但是有的乳制品生产企业按照GB19302—2010生产的酸奶配料表仍含有食用香精，此外，麦芽酚在多个未标注添加香精的乳制品中有检出，而其它三种香料化合物在未标注添加香精均未检出，可能是因为在乳制品热加工过程中，发生美拉德反应生成麦芽酚，不同样品麦芽酚含量差异较大，应研究其内源性产生的麦芽酚水平以便制定合适的限量值以判断是否有额外添加。

3 结论

综上所述，本文建立了高效液相色谱-串联质谱测定乳制品中麦芽酚、乙基麦芽酚、香兰素和乙基香兰素含量的方法，前处理采用水-叔丁基甲醚提取，氢氧化钠溶液反萃实现富集和净化后调酸分析。此方法前处理成本低，快速高效，净化效果好，仪器分析时间短，灵敏度高，四种化合物在各种乳制品中呈弱基质抑制效应，无需采用基质曲线或者内标校正补偿其基质效应。结果表明该检测分析方法稳定、可靠、易于推广，可应用于不同乳制品中四种香料化合物的检测，有望为相关检测标准的建立提供依据。

相关链接：叔丁基甲醚，乙基麦芽酚，香兰素，乙基香兰素

声明：本文所用图片、文字来源《食品工业科技》，版权归原作者所有。如涉及作品内容、版权等问题，请与本网联系