农药标准物质（四）

2、蒸馏法的操作步骤和注意事项

(1)蒸馏装置的组成

减压蒸馏装置主要由3部分组成，包括蒸馏部分、抽气部分以及在它们之间的保护和测压装置。

①蒸馏部分：蒸馏部分由蒸馏瓶、冷凝器和接收瓶组成。蒸馏瓶采用两个颈的克氏蒸馏瓶，一个颈插温度计，另一个颈插一根毛细管，起到防止暴沸作用。冷凝器采用普通冷凝管，接收瓶为普通接收瓶。

②抽气部分及保护和测压装置：这两部分主要由真空泵、真空胶管、保护装置和测压装置组成。在保护系统中，要有安全瓶，主要用于调节系统压力及放气。封闭式压力计用于测量系统中的实际压力。设3个吸收塔，第一个装无水氯化钙或硅胶，用于吸水；第二个装粒状氢氧化钠，用于吸酸；第三个装石蜡片，可吸收烃类气体。普通旋片式真空泵达不到工作压力时，还应串联真空扩散泵。

减压蒸馏时，必须保证系统不漏气，各接口要涂好真空脂，不可用普通胶管代替真空胶管。

(2)蒸馏具体操作步骤

①加料：液体量不要超过克氏蒸馏瓶容积的一半，可防止暴沸或液体的飞沫被蒸气带走。克氏蒸馏瓶要有2/3浸入到浴液中。

②减压检漏，调压：调整到需要的压力，如敌敌畏为0.1Pa。减压蒸馏，采用磁力加热搅拌器是一种非常简便、高效的方法。

③加热：100°C以下样品采用水浴，100～250°C油浴(甘油等)，250°C以上砂浴，超过250℃时不能采用玻璃蒸馏器。

④沸腾：此时，温度计指示急剧上升。

⑤蒸馏：开始蒸馏时既不要快也不能太慢，控制速度为每秒1～2滴。接前馏分，注意观察压力和温度的变化。当达到所需馏分沸点时，更换接收瓶；当温度超过所需馏分沸点时，停止蒸馏。减压蒸馏法对在常压下蒸馏易分解或遇热易分解的样品非常有效。一般要进行2～3次重蒸馏，才能达到要求。

(3)蒸馏注意事项

温度计水银球的上限与克氏蒸馏瓶支管下限在一水平面上，先搅拌、减压，后升温。

减压蒸馏法适用的农药品种有：2，4-滴丁酯、敌敌畏、稻瘟净、禾草丹等。

(三)柱层析法

柱层析法的特点是应用范围广，固体、液体都适宜，操作简便，分离效率高。

1、柱层析的基本原理

根据组分在固定相中的作用原理不同，柱层析可分为吸附层析、分配层析、离子交换层析和排阻层析。农药纯化常用吸附层析和分配层析。

(1)吸附层析：吸附层析根据固定相(吸附剂)对混合物中各组分的吸附能力不同实现分离和纯化。例如用硅胶作固定相，当混合物的溶液流经固定相时，混合物中各组分就被吸附在硅胶颗粒表面上：再用单一溶剂或混合溶剂作流动相淋洗该柱，由于硅胶对混合物中各组分的吸附能力不同，已被吸附在硅胶上的各组分就会以不同的速度解吸并重新回到溶剂中。随着溶剂的向前移动，已解吸的各组分遇到新的吸附剂就又再一次以不等的吸附力被吸附，当新的流动相流过时，它们就又一次解吸进入流动相并向前移动。如此在层析柱上不断地发生吸附、解吸、再吸附、再解吸，使混合物中各组分在吸附剂表面上表现出的吸附能力的微小差异，经多次重复积累而成为大的差异。结果吸附力小的组分先从层析柱中流出，吸附力大的组分后从柱中流出，从而达到分离的目的。

(2)分配层析：分配层析与吸附层析的不同之处是混合物中各组分的分离是根据其在两相中的分配系数的差异来实现的。吸附层析实质属于液固色谱范畴，而分配层析属于液液色谱范畴。

2、柱层析的基本操作步骤

(1)选择层析柱：层析柱的长度和口径之比以10：1为宜，碱式滴定管可当层析柱来使用。

(2)选择吸附剂：吸附剂的要求为：①不溶于选用的淋洗液；②不与淋洗液和分离组分起化学反应，也不起催化作用；③无色，粒度均匀，细度合适。常用吸附剂有硅胶、氧化铝、弗罗里硅土等。

一般分离极性强的物质，选用吸附力小的吸附剂；分离极性弱的物质，应选用吸附力强的吸附剂。

(3)填装吸附剂：填装吸附剂时，要求均匀紧密一致。填装有干法和湿法两种，干法不容易填装均匀，湿法容易装好层析柱。湿法是称取适量的吸附剂，一般为分离样品质量的50倍，加入溶剂调和，调好后倒人柱中，使其自然缓慢沉降。

(4)选择淋洗剂：可采用薄层色谱的方法选出理想的淋洗液。选择原则：分离极性强的农药，选用吸附能力较弱的吸附剂和极性较强的溶剂作淋洗液；分离极性弱的农药，宜选用吸附能力较强的吸附剂和极性较弱的溶剂作淋洗液；在单一溶剂作为淋洗液不理想时，可加入一些极性更强或更弱的溶剂来调节淋洗液的极性，以达到最佳分离效果。

(5)洗柱：添加淋洗液，除去层析柱中的残留空气，使柱更紧密均匀，保持柱顶不干。

(6)加样：待洗柱时的淋洗液离柱填料平面1mm左右，加入待分离的组分。滴加淋洗液，流速为每秒l滴，或每4s1滴。在操作过程中，防止柱顶端进人空气，不要让柱填料裸露在空气中。

(7)洗脱：根据分离情况，切割收集各组分，进行鉴定，找到纯度高的馏分，然后蒸馏干燥得到农药纯品。

柱层析适用于杀草丹、丁草胺、2，4-滴丁酯等农药品种的纯化。

(四)区熔提纯法(区域熔融法)

区熔提纯法是根据被提纯农药中各组分在相变中重分布的原理来得到较纯组分的提纯方法。杂质一般使纯物质的熔点降低，随着熔区的移动，能使杂质一起移动，而富集于一端，纯物质则向相反的方向移动而富集于另一端。该方法设备简单，提纯效率高，操作可自动化，应用范围广。一般操作先卧式提纯6次，再立式提纯1次。本方法适用于六六六4种异构体等农药的提纯。

(五)升华法

所谓升华就是指物质不经过液态而直接从固态转变为气态的现象，这样的农药必须具有相当高的蒸气压。升华法有常压和减压两种方法。可以升华的农药品种有：硫黄、六六六、氯化乙基汞、磷化铝等。升华法在农药纯品制备中应用较少。

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