气质联用法对食品中甜蜜素检测的定性定量分析（二）

2、目标化合物的定量分析

试验中我们发现，不同的实验条件下，产物B环己醇均能生成，只是主副产物之间的比例发生了改变。将10mL0.05mg/mL的甜蜜素标准溶液进行衍生，条件1：加入硫酸溶液2.5mL，亚硝酸钠的量分别为0.1mL、0.2mL、0.3mL、0.4mL、0.5mL，衍生结果如图4。结果表明，产物B环己醇伴随着产物A产生，随亚硝酸钠量增加，两者之和增加，产物1的增加幅度明显快于产物2，产物1与产物2之间的比例为1.51、1.84、2.12、2.50、2.73，两者之间的比例也随着增加。
 

试验条件2：加入亚硝酸钠溶液2.5mL，硫酸溶液的量分别为：0.5mL、1.0mL、1.5mL、2.0mL、2.5mL，衍生结果如图5。结果表明，硫酸溶液加人量在0.5mL～2.5mL之间，随酸性条件加强，产物A与产物B生成的量均有所增加，产物A增速快于产物B，两者之间的比例分别为1.31、1.74、2.04、2.08、2.01，呈增大趋势，并在2.0mL达到最高点。

同时，我们考察了衍生产物随时间的变化情况，发现随时间延长，产物A和产物B响应发生改变，产物A减少，产物B增加，但两者加和基本保持不变，这一结论在有些研究中也得到证实；相同条件下，不同底物衍生结果，峰A和峰B比例也不相同。综合上述结果，在对甜蜜素进行定量时，产物B环己醇在定量过程中不能忽略。所以将峰A和峰B响应值加和来进行定量分析。峰A定量离子55，峰B定量离子57。

3、标准曲线的线性关系和检测限

标准溶液系列制备及衍生化：准确移取甜蜜素标准溶液（1.00mg/mL）0.50mL、1.00mL、2.50mL、5.00mL、10.00mL于50mL容量瓶中，加水定容，配制成系列浓度标准系列为：0.01mg/mL、0.02mg/mL、0.05mg/mL、0.10mg/mL、0.20mg/mL。准确移取标准系列溶液10.0mL与样品術生化步骤相同。

标准曲线曲线：Y=4.51817x106X+6.1458x105，线性相关系数（R2）为0.9995，其中Y为衍生物的峰面积之和，X为甜蜜素浓度。研究中同时对产物峰A单独进行了线性分析，线性相关系数（R2）为0.9978，这一结果验证了采用两种产物加和来外标法定量计算的科学性。逐步稀释标准溶液，以≥3倍信噪比（S/N）计算出甜蜜素的检出限（LOD）为1.5mg/kg。

4、回收率试验

添加10mg/kg、50mg/kg、100mg/kg的标样浓度，以麻花、果脯和面包为基质进行回收率实验，采用外标法定量，回收率在87.3%～106.5%。

5、精密度和重复性

准确移取标准系列溶液（0.05mg/mL）10.0mL于带盖离心管中，样品前处理：称取打碎、混匀的样品5g于50mL离心管中，加30mL水，振摇，超生远取20min，混匀，离心（3000r/min）10min，过滤，用水分次洗涤残渣，收集滤液并定容至50mL。高脂高蛋白样品暂不在研究范围内。衍生物浓度为100μg/mL，通过本方法进行测定分析，保留时间相对标准偏差RSD为0.56%（n=6）），峰面积相对标准偏差RSD为6.17%（n=6）。

三、结论

通过气相色谱质谱联用技术，对食品中的甜蜜素衍生物进行检测分析，利用甜蜜素2个衍生物的保留时间和离子来进行双重定性，使得检出的假阳性概率大大降低；该方法具有较好的重现性，保留时间相对标准偏差RSD为0.56%（n=6），峰面积对标准偏差RSD为6.17%；方法中得到的标准曲线线性较好，线性相关系数（R2）达到0.9995；不同浓度的加标回收率在87.3%～106.5%；方法的检出限为1.5mg/kg，低于国标，是-种行之有效的检测方法。

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