志贺氏菌标准检验方法（一）

志贺氏菌(shigella)是人类重要的肠道致病菌之一，食物源性的痢疾爆发(即志贺氏菌食物中毒)，主要是食用了被污染该菌的食品和水所致，其检验方法一般为增菌、分离、生物学试验及血清学鉴定。

一、检验方法

(一)操作步骤

1、增菌。称取检样25g，加入装有225mLGN增菌液的500mL广口瓶内(固体食品应用均质器以8000--10000r/min打碎1min，或用乳钵加灭菌砂磨碎，粉状食品应用灭菌金属匙或玻璃棒研磨使其乳化)，于36±1℃培养6～8h。

2、分离。取增菌液l环，划线接种于HE琼脂平板或SS琼脂平板一个，麦康凯琼脂平板或伊红美蓝琼脂平板一个，于36±1℃培养18～24h。志贺氏菌在这些培养基上呈现无色透明不发酵乳糖的菌落。

3、生物化学试验。挑取平板上的可疑菌落，接种三糖铁琼脂和半固体各一管，一般应多挑几个菌落以防遗漏。志贺氏菌属在三糖铁琼脂内的反应结果为底层产酸、不产气(福氏志贺菌6型可微产气)，斜面产碱，不产生硫化氢，无动力，在半固体管内沿穿刺线生长。具有以上特性的菌株，疑为志贺氏菌，可做血清凝集试验。

在做血清学试验的同时，应进一步做苯丙氨酸脱氨酶、赖氨酸脱妒酶，西蒙氏柠檬酸盐和葡萄糖铵尿素、KCN、水杨苷、七叶苷试验，志贺氏菌属均为阴性反应。必要时应做革兰氏染色检查和氧化酶试验，应为氧化酶阴性的革兰氏阴性杆菌，并以生化试验方法做4个生化群的鉴定。

4、血清学试验。挑取三糖铁琼脂上的培养物，做玻片凝集试验。先用四种志贺氏菌多价血清检查，如果由于K抗原的存在而不出现凝集，应将菌液煮沸后再检查，再用A1、A2、B群多价和D群血清分别试验，如系B群：福氏志贺氏菌，则用群和型因子血清分别检查，确定菌型。

四种志贺氏菌多价血清不凝集的菌株，可用鲍氏多价血清1，2，3分别检查，并进一步用1～15各型因子血清确定菌型，如果不是鲍氏志贺氏菌，可用痢疾志贺氏菌3～12型多价血清及各型因子血清检查。

5、结果报告：综合以上生化和血清学的试验结果，判定型别并作出报告。

如果生化试验判定为痢疾志贺氏菌或鲍氏志贺氏菌，由于血清种类不全而未获得血清学分型的最后结果时，可报告为“痢疾(或鲍氏)志贺氏菌，型别待定”，并送有条件的实验室进一步鉴定。

(二)检验程序

二、结果分析判定

(一)一般培养性状

志贺氏菌为需氧性革兰氏阴性无芽胞杆菌，在普通培养基上易于生长最适pH为6．4～7．8，最适温度为37℃，于10～40℃均能繁殖，在选择性或鉴别培养基上为无色，半透明，微凸起，光滑，湿润，边缘整齐，直径约2mm大小的菌落，但宋内氏志贺氏菌常出现R形菌落。在液体培养基中呈均匀混浊，无鞭毛，无动力。

(二)增菌与分离

志贺氏菌因在食品中的存活期较短，当样品采集后应尽快进行检验，如不能立即检查时，可将标本放入冰箱保存。对该菌的检验至今还没有很好的增菌方法，一般采用GN增菌液，缩短增菌时间，6～8h增菌液内细菌轻微生长，即可接种鉴别平板，以免时间较长，其他肠道非致病细菌生长过多而影响志贺氏菌的分离。

用于分离鉴别的培养基，一般不少于两个，采用中等选择性的HE或SS琼脂平板和弱选择性的麦康凯或EMB琼脂平板，以利于志贺氏菌的阳性检出率。

(三)生化学性状

根据志贺氏菌的生化学特性，均能发酵葡萄糖，不产生气体(少数福氏6型能产生少量气体)，不发酵水杨苷和侧金盏花醇，不分解尿素，不产生硫化氢，在西蒙氏柠檬酸盐培养基上不生长，V-P为阴性，不发酵乳糖(宋内氏志贺氏菌可迟缓发酵)，不能使赖氨酸脱羧，宋内氏菌和鲍氏B型可使鸟氨酸脱羧，其他均为阴性。

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