2.2.2 HPLC定量检测

前期实验结果表明，苦荞麸皮黄酮精品抑菌效果优于粗品，而两者主要黄酮成分相同，因此对粗品及精品中芦丁、山奈酚-3-O-芸香糖苷、槲皮素和山奈酚4种黄酮单体进行定量分析。由表3可知，经大孔树脂富集精制后，苦荞黄酮精品中芦丁、山奈酚-3-0-芸香糖苷和槲皮素的含量均有所增加，精品的总黄酮含量可达79.50％，精制倍数可达2.84倍。

2.3 4种黄酮成分的抑菌活性研究

为明确4种黄酮成分在抑菌中的作用，测定了4种单体的抑菌活性，4种黄酮单体对6种供试菌的抑制作用具有选择性和差异性。表4结果可知，槲皮素的抑菌活性最强，对5种供试菌的MIC值均为12.5mg/mL；其次是山奈酚和山奈酚-3-0-芸香糖苷，对6种供试菌的MIC值均在25mg/mL及以下；芦丁的抑菌活性较差，且无杀菌效果。

3 结语

苦荞作为常见的药食两用作物，在食品加工中广泛应用，而其麸皮多被丢弃，作者探究了苦荞麸皮黄酮类化合物对常见病原菌的抗菌活性，以期为苦荞麸皮的开发利用提供理论依据。采用平板打孔法及二倍稀释法对苦荞麸皮粗品及精品的抑菌活性进行研究，结果表明苦荞麸皮黄酮粗品及精品对大肠杆菌、志贺氏杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、藤黄微球菌、肠球菌6种常见致病菌均有一定抑制作用，尤其是对金黄色葡萄球菌的抑制作用最强。王丽娟等研究表明黑苦荞中的黄酮类化合物对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌均有较好的抑菌作用。这与本研究结果相一致。

大孔树脂富集后苦荞麸皮黄酮的抑菌活性明显优于富集前，抑菌活性的强弱可能与黄酮含量存在量效关系或与其黄酮成分相关。通过HPLC对苦荞麸皮黄酮粗品与精品黄酮类化合物的成分及含量进行分析，大孔树脂富集前后成分无变化，主要黄酮成分均为芦丁、山奈酚-3-0-芸香糖苷、槲皮素和山奈酚，但精品中芦丁、山奈酚-3-0-芸香糖苷和槲皮素的含量均有所增加，精品的总黄酮含量可达79.50％，精制倍数可达2.84倍。测定了4种黄酮单体的抑菌活性，研究表明含量最多的芦丁的抑菌活性不佳，槲皮素的抑菌活性更强。槲皮素是黄酮醇的典型代表，它已被证实具有很强的抗菌活性，Wang等研究发现革兰氏阳性细菌对槲皮素高度敏感，且研究表明刚槲皮素与氨苄西林、头孢拉定等抗生素联合使用对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌能够有效降低耐药性，提高其抗菌活性。赵晓由其等对从高良姜中分离得到的山奈酚的体外抗菌实验表明山奈酚对革兰氏阳性菌金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌具有较强抗菌活性。槲皮素与山奈酚对革兰氏阳性菌的抑菌效果更强。

国内外对山奈酚-3-O-芸香糖苷抑菌活性的研究较少，本研究发现，山奈酚-3-0-芸香糖苷对于常见食源性微生物显示出一定抑菌效果。天然存在的黄酮类化合物大多以甙类形式存在，并在两个芳环上常有-0H或-OCH取代基，其抗菌活性取决于其母体上羟基的取代程度。有研究表明黄酮分子中C4=0和C5-OH、C7-0H是抗菌活性的首要基团，其次为C3-0H基团，C3’-0H、C4’-0H也具备一定的抗菌活性，且类黄酮苷元比其相应的糖苷具有更高的抗菌活性。芦丁和山奈酚-3-0-芸香糖苷分别是槲皮素和山奈酚对应的糖苷，它们的差异在C3位置，上述发现支持本研究中单体抑菌活性实验的结果。此外，尽管芦丁的抑菌活性弱，但有研究表明芦丁可以增强黄酮类化合物的抗菌活性。Muha-mmad等发现芦丁与桑黄素单独无活性，但联合使用对供试细菌有活性，且槲皮素与芦丁、桑黄素三者联合使用对供试菌的抑制作用比单独作用有进一步增强。这提示芦丁可能通过增强其他3种黄酮化合物的抑菌活性，使苦荞麸皮黄酮精品的抑菌活性优于粗品。
通过对苦荞麸皮总黄酮及其有效成分的抑菌活性的分析，发现苦荞麸皮黄酮在抗菌方面具有广泛的应用潜力。使用大孔树脂纯化后可以有效提升其抑菌活性，苦荞麸皮黄酮的抗菌活性成分芦丁、山奈酚-3-0-芸香糖苷、槲皮素和山奈酚的抑菌能力大小具有一定的构效关系.但4种黄酮单体的协同抑菌机理及苦荞麸皮黄酮的体内抗菌活性有待进一步研究。本研究表明苦荞麸皮通过浸提、浓缩、精制等技术手段，能很大提高其抑菌功能活性，提升其附加值，是一种有深度开发价值的天然抑菌资源。

相关链接：山奈酚-3-O-芸香糖苷，芦丁，槲皮素，金黄色葡萄球菌

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