连续流动分析法测定杏仁中氰化物（一）

发布时间：2022-01-01 19:59 编辑者：特邀作者周世红

氰化物是含氰基的一类化合物的总称，是广泛存在于自然界的剧毒物质，可抑制组织细胞生物氧化酶活性，阻滞三羧酸循环，造成“细胞内窒息”。生活中氰化物中毒以口服为主(如误食含氰果仁）。GB5009.36—2016《食品安全国家标准　食品中氰化物的测定》中提及的定量检测方法主要有分光光度法及气相色谱法，但并未包含杏仁中的氰化物检测。在食品监测工作中，杏仁中氰化物的检测一般采用气相色谱法，但该方法精密度偏差过大且偏差方向难控，方法中因试剂等影响造成批次间电子俘获（ECD）响应重复性差。目前连续流动仪测定氰化物的方法广泛应用于职业卫生检测、环境检测及食品检测等众多领域。韦小烨等建立的鲜木薯中氰化物的流动注射测定法线性范围宽、重复性好，对于油脂含量较少的样品，可以直接水解提取，取上清液过滤后进行分析。然而，对于含有大量油脂的样品，如杏仁，如何在前处理过程中除去干扰，同时做到高回收率及高精密度等结果的测定方法尚未见报道。结合食品监测方法及部分研究成果，研究人员建立了连续流动分析仪测定氰化物的方法，杏仁样品经前处理后，仪器密闭蒸馏出氢氰酸，与氯胺T反应生成氯化氰，以异烟酸–巴比妥酸作染料，代替异烟酸–吡唑啉酮规避苯甲醛与吡唑啉酮反应产生白色混浊的干扰，生成物于600nm处比色定量。笔者建立连续流动分析法测定杏仁中的氰化物，采用正己烷萃取除去油脂，滤膜过滤除去固体颗粒，拓展了杏仁中氰化物检测的方向。

1 实验部分

1.1 主要仪器与试剂

连续流动分析仪：SKALARSAN5000型，带有四针自动进样器及循环冷却水系统，荷兰SKALAR公司。气相色谱仪：安捷伦7890A，带有CTC顶空进样器及ECD检测器，美国安捷伦科技公司。超声清洗仪；KQ2200DB型数控，昆山超声仪器有限公司。电子分析天平：AL204–IC型，感量为0.001g，瑞士梅特勒–托利多公司。低温冷冻离心机；SIGMA2–16K型，德国希格玛公司。氰化物标准溶液：50mg/L，编号为GBW（E）080115，中国计量科学研究院。水相针式滤器（聚醚砜）：13mm×0.45μm。氢氧化钠、邻苯二甲酸氢钾、氯胺T、1，3-二甲基巴比妥酸、异烟酸、正己烷：分析纯，国药集团化学试剂有限公司。盐酸：分析纯，天津市大茂化学试剂厂。月桂醇聚氧乙烯醚（Brij35）：CAS号为9002–92–0，荷兰SKALAR公司。实验用水为超纯水。

1.2 溶液配制

pH5.2的缓冲溶液：称取氢氧化钠2.3g溶解于500mL超纯水中，加入20.5g邻苯二甲酸氢钾，加超纯水至975mL后，分别用1mol/L的盐酸和氢氧化钠溶液调节pH至5.2，定容至1L后加入1mL月桂醇聚氧乙烯醚，充分溶解后过滤，于棕色瓶中冷藏，待用。

氯氨T溶液：称取氯胺T2.0g，用超纯水定容至1000mL，过滤后使用。

显色剂：称取氢氧化钠7g于约500mL超纯水中，再加入1，3-二甲基巴比妥酸16.8g、异烟酸13.6g，加入970mL超纯水溶解，用1mol/L的盐酸和氢氧化钠溶液调节pH至5.2。

氰化物系列标准工作溶液：吸取2mL氰化物标准溶液于50mL容量瓶中，用超纯水定容至标线，得2.0mg/L氰化物标准溶液，再分别吸取0、0.25、0.50、1.0、1.5、2.5、5.0、12.5mL上述2.0mg/L氰化物标准溶液于比色管中，用超纯水定容至25.0mL，配制成氰化物质量浓度分别为0.02、0.04、0.08、0.12、0.20、0.40、1.00、2.00mg/L的系列标准工作溶液，现用现配。

1.3 样品前处理

低温下准确称取1.000g（精确至0.001g）已粉碎均匀的样品于样品管中，加入约40mL的超纯水，立即盖紧密封，超声提取3次，每次提取10min，每次提取间隔为1h，以防止其内部液体温度过高产生膨胀，继而顶出密封盖，从而造成样品损失。于25～40℃放置48h，使样品充分水解（应充分振摇，使样品无结块，振摇时应按住样品管盖，防止样品溢出），再把样品管放入冰箱于4℃冷藏2h后，以10000r/min冷冻离心10min，取出上清液，在样品管中加入超纯水10mL，振摇，冷冻离心，将取出的上清液合并后，加入10mL正己烷，充分振摇，静置分层后舍去正己烷，水层经过0.45μm的水系过滤膜过滤，滤液定容至100mL，加入氢氧化钠0.2g使氢氧化钠质量浓度为2g/L，冷藏，待混匀，待测。