正常牛奶中的尿素含量约200－300mg/L，近年来，一些不法商家为了提高利润空间，在牛乳中加入尿素虚高蛋白质含量，而高浓度尿素会造成泌尿系统排泄障碍，导致身体电解质失衡，对人体造成损害。因此，测定牛乳中尿素的含量十分重要。

目前，尿素含量的检测方法主要有二乙酰一肟比色法、流动注射分析仪法、电化学发光法、液相色谱法等，对牛乳中尿素的定量检测方法较少。笔者通过参考和借鉴游泳池水中尿素含量的测定及牛乳前处理的方法，对牛乳中尿素含量的测定进行了实验和探索论证，根据二乙酰一肟与尿素的反应原理，对影响尿素显色反应的实验条件做了选择研究，最后对该方法的精密性、回收率及检测限进一步验证，最终确定该方法可应用于牛乳中尿素含量的检测。

一、材料与仪器

1.实验原料。

实验用乳购于超市中不同品牌的袋装奶及农贸市场销售的散装奶。

2.主要仪器。

SP－756P紫外可见分光光度计（上海光谱仪器有限公司），普利赛斯ES225SM－DR分析天平（瑞士普利赛斯公司）。

3.试剂。

（1）尿素标准物质（99.8％）：准确称取尿素纯品标准物质100mg，溶于0.05mol/L硫酸中，轻轻振摇，使尿素完全溶解，并于100mL容量瓶中定容至刻度，使最终浓度为1000mg/L，混匀后将其转入棕色瓶中，于－4℃冰箱中保存备用。

（2）尿素标准使用液：吸取10.0mL的尿素标准储备液并用纯水稀释至100mL，使其浓度为100mg/L。

（3）二乙酰一肟溶液（0.5％）：称取5.0g二乙酰一肟并溶于水中，用容量瓶定容至1000mL。

（4）三氯化铁－氨基硫脲－硫酸混合试剂：将200mL的浓硫酸缓缓加入800mL水中，冷却后加入0.1g三氯化铁和1.0g氨基硫脲，用纯水定容至1000mL。

（5）亚铁氰化钾溶液（10.6％）：称取10.6g亚铁氰化钾，加水溶解定容至100mL。

（6）乙酸锌溶液（22.0％）：称取乙酸锌22.0g，加水溶解并加入5.0mL冰乙酸，定容至100mL。

二、实验方法

1.实验原理。

二乙酰一肟在酸性条件下水解转化为双乙酰，与尿素在强酸条件下缩合成为红色的二嗪化合物。该化合
物颜色的深浅与尿素含量成正比，在波长525nm处有最大吸收峰。

2.测定方法。

取混匀样品10.0mL于100mL容量瓶中，加入亚铁氰化钾和乙酸锌溶液各4.0mL，用纯水定容，振摇均
匀。放置30min后，取10.0mL上清液，加入2.0mL二乙酰一肟溶液，再加入三氯化铁－氨基硫脲－硫酸混合试剂10.0mL，混匀。将上述各管在沸水浴中加热14min，置流动水中冷却2min，并用纯水稀释至
25mL。以纯水作参比，用1cm比色皿，于525nm波长处测定吸光度值。

3.实验条件。

（1）吸收波长的确定。取适量标准溶液，在480nm－560nm范围内进行全波长扫描，结果见图1。

由图1可知，吸光值在480nm－525nm范围内逐渐增加，且在525nm处达到最大，在525nm－560nm范围内又逐渐减小，由此确定最佳吸收波长为525nm。

（2）反应温度的选择。由于该反应在常温下显色反应进行得很慢，故考虑在加热的水浴中进行反应，分别将水浴锅的温度设置为60℃、70℃、80℃、90℃、100℃，观察其显色反应，做出反应温度与吸光度的关系图，详见图2。

由图2可以看出，样品吸光度受温度影响较大，随着温度的升高而不断增大，在温度接近100℃时，吸光度达到最高，所以选择沸水浴加热为最佳的温度条件。

声明：本文所用图片、文字来源于《食品添加剂检测》，版权归原作者所有。如涉及作品内容、版权等问题，请与本网联系

相关链接：二乙酰，电解质，氨基硫脲