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维生素C又称L-抗坏血酸,是人体正常生理代谢所必不可少的一种维生素,能调节人体氧化还原代谢反应,增强人体对外界环境的抗应激能力以及免疫能力,水果中VC含量丰富,是人体VC重要摄取来源之一。目前,测定VC的方法有高效液相色谱法、荧光法、2,6-二氯靛酚滴定法、电化学分析法,本文采用紫外-可见分光光度法对VC的稳定性、最佳提取条件和10种常见水果的VC含量进行了考察与测定,为人们鉴定水果营养价值及储存方式提供一定的参考。
1材料与方法
1.1材料
猕猴桃、冰糖橙、橙子、桔子、草莓、油桃、火龙果、菠萝、梨、苹果均购自某农贸市场;抗坏血酸标准品(AR);冰乙酸(AR);磷酸(AR);盐酸(AR);草酸(AR)。
1.2仪器
UV759CRT紫外-可见分光光度计(上海佑科仪器有限公司);JY电子天平(上海方瑞仪器有限公司);GZX-9246数显鼓风干燥箱(上海博迅实业有限公司)。
1.3提取工艺流程
水果样品→去蒂、清洗→研磨成匀浆→称取试样→加入提取剂→避光环境下浸提→4000r/min离心处理→紫外-可见分光光度计测定(243nm)其吸光度→计算质量
1.4实验方法
准确称取5.0000g预处理后的样品匀浆于烧杯中,按料液比(g∶mL)1∶2的比例加入2%醋酸溶液,在室温(20℃)避光环境中浸提30min,将浸提液在4000r/min条件下离心处理10min,取上层清液定容至100mL容量瓶后,用紫外可见分光光度计在最大吸收波长243nm处测定吸光度。每组试样做七次平行试验,取其平均值,根据维生素C标准曲线计算得出样品中维生素C的含量。
1.5紫外吸收曲线的测定
为了考察样品维生素C的含量,采用浓度为0.08mg/mL的标准应用液和样品溶液在紫外-可见分光光度计上进行波长扫描,紫外吸收曲线见图1和图2。
由图1及图2可以看出维生素C标准品的λmax=243nm,水果样品的λmax=244nm,它们的最大吸收波长几乎一致,这说明维生素C在酸性溶液中的最大吸收波长为243nm。
1.6结果计算
将待测液的吸光度值代入维生素C标准曲线,查出待测样品浓度,再根据公式计算出样品中VC的含量。
2结果与讨论
2.1VC提取正交实验结果分析
通过对料液比、醋酸浓度、提取时间、提取温度等单因素对VC提取效果的分析,进行正交实验。为了确定最佳提取效果,以提取液在λmax=243nm处吸光度为评判指标,对以上四个因素设计L9(34)正交实验,因素水平表见表1,正交实验结果见表2。
由表2可以看出,以上四个因素对VC提取效果的影响的主次顺序依次为A>B=C>D,即:料液比>醋酸浓度=提取时间>提取温度。从正交分析数据可以得出,维生素C的最佳提取条件为A1B1C1D1,即:料液比1∶2(g∶mL)、醋酸浓度2%、提取时间30min以及提取温度20℃。
2.2维生素C标准曲线的绘制
本实验采用紫外-可见分光光度法对VC的含量进行了测定,将1mg/mL的VC标准储备液梯度稀释为0.02,0.04,0.08,0.12,0.16,0.20mg/mL的系列溶液分别检测其吸光度。以质量浓度为横坐标,吸光度为纵坐标绘制维生素C标准曲线(见图3)。
由图3可以看出,维生素C在浓度为0.02~0.20mg/mL之间符合朗伯-比尔定律,有良好的线性关系,所得回归方程为Y=3.7994X-0.0066;相关系数R2=0.9996。
2.3样品含量测定
选取新鲜水果桔子、草莓、橙子、红心火龙果等10种样品测定其中VC的含量,根据不同水果样品下测得的吸光度,在维生素C标准曲线中读出提取浓度,计算得出不同水果样品提取质量的柱状关系图,如图4。
由图4可以得出,水果样品中维生素C含量顺序为猕猴桃(407.58mg/100g)>冰糖橙(390.86mg/100g)>橙子(319.31mg/100g)>桔子(284.65mg/100g)>红心火龙果(253.32mg/100g)>草莓(244.76mg/100g)>油桃(201.01mg/100g)>菠萝(181.44mg/100g)>梨(170.95mg/100g)>苹果(144.95mg/100g)。
2.4方法检出限
分别测定试剂空白8组,其吸光度值见表2.3,在置信度约为99%时,其检出限MDL=t(n-1.099)×S=0.003mg/mL。
2.5精密度
实验对10种水果样品分别制备7个平行样,检测其吸光度,计算含量。测得相对标准偏差(RSD)在0.09%~0.58%之间,精密度较好。
2.6加标回收率
采用样品加标的方法进行加标回收率测定,取三份样品加入不同浓度的标液测定其吸光度,平行测定6组,加标回收率在96.6%~106.8%之间。
3结论
本文采用紫外分光光度法对生活中常见的水果中VC的含量进行测定分析,结果表明低浓度的醋酸在冷藏避光的条件下对维生素C具有一定的保护作用。通过单因素实验和正交实验得出:料液比对VC浸提效果影响较大,温度对提取效果影响较小,料液比1∶2(g∶mL),浓度2%,时间30min,温度为20℃时是最佳提取条件。测定结果表明:猕猴桃中VC含量较高,为407.58mg/100g,苹果中的VC含量相对较低,为144.95mg/100g。该方法检出限为0.003mg/mL,RSD<1%,回收率在96.6%~106.8%之间,本方法检测水果中VC的含量可以得到较好的结果。
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