茶多酚是茶叶中黄烷醇类、花色苷类、黄酮类、黄酮醇类和酚酸类等多酚类化合物的总称。纯品为无色无毒无定形粉末，常温下呈浅绿色或者浅黄色。科学研究表明：茶多酚具有抗氧化、抗衰老、清除自由基、抗菌、抗癌、降低血脂等多种生理功能和药理功效，在食品、医药、保健、化工等诸多领域具有广阔的应用前景，因此从茶叶中提取及纯化茶多酚日益受到广大学者的关注。

目前纯化茶多酚的方法主要有溶剂萃取法、离子沉淀法、超临界流体萃取法、树脂法等。其中有机溶剂萃取法工艺简单，但产品精制过程会使用大量的有机溶剂，环境污染大，不符合绿色化学发展理念；超临界流体萃取法提取效率低、设备要求高、生产成本高，很难大规模投入工业化生产；离子沉淀法是利用金属离子与茶多酚反应生成沉淀而脱离溶液体系从而得到纯化，该法所制得产品由于受到重金属离子的污染，制得产品很难被食品、医药、保健等领域所接受。树脂分离法是一种新兴的纯化茶多酚的方法，该法是利用树脂对茶多酚的选择吸附及解吸而实现产品分离的过程，具有效率高、绿色环保的工艺特点，而且树脂再生能力强，可反复利用，节约原料。高彦华等研究了H1020树脂对茶多酚的纯化，发现该树脂对茶多酚的吸附率达到80.33％，洗脱率达到83.5％。经过干燥得到茶多酚产品的纯度为98％以上。连志庆探究了NKA-Ⅱ、LX-68M和LX-17三种树脂对茶多酚的吸附及解吸性能，成功地制备了茶多酚含量91.35％，EGCG含量48.23％的茶多酚产品；由于树脂种类繁多，对茶多酚选择性吸附的树脂的筛选工作将具有重要意义。本研究以粗老绿茶为原料，对XDA-5大孔树脂分离茶叶中茶多酚工艺进行了探究，通过探究上样量，吸附流速，上样温度，解吸剂用量及洗脱流速对茶叶中茶多酚分离效果的影响，从而优化茶多酚纯化工艺，为茶叶及其它天然产物中茶多酚的纯化工艺线路的选择提供理论依据。

一、材料与方法

1、主要仪器以及试剂

（1）仪器

KQ-500DE数控超声波清洗器(昆山市超声波仪器有限公司)、101型电热鼓风干燥箱(北京市永光明医疗仪器有限公司)、LX-07A万能高速粉碎机(红光工贸有限公司)、EL204-IC电子分析天平(杭州汇尔仪器设备有限公司)、800型离心机(上海手术器械厂)、T6新世纪可见分光光度计(北京普析通用仪器有限公司)、SHZ-D(Ⅲ)循环水真空泵(巩义市予华仪器有限责任公司)、RE-52AA旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)、FD-1-50冷冻干燥机(北京博医康实验仪器有限公司)。

（2）试剂

乙醇(A.R)；无水碳酸钠(A.R)；氢氧化钠(A.R)、没食子酸标准品(HPLC≥98％，生产批号：Y19M8C36143，上海源叶生物科技有限公司)；茶多酚标准品(纯度≥99％，生产批号：Y1J6B1，上海源叶生物科技有限公司)；福林酚(B.R，国药集团化学试剂有限公司)；实验用水均为二次蒸馏水，所用试剂未加特殊说明均为分析纯。实验用XDA-5六种大孔树脂均购于安徽皖树化工销售有限公司，茶叶材料于2017年秋季采摘于河南光山凉亭农家茶园，晾干后粉碎备用。

2、茶多酚的提取

在分析天平上称取茶叶末25g(精确到0.001g)置于烧杯中，加入250mL40℃预热的蒸馏水，搅拌、摇匀。将烧杯放入数控超声清洗器中按照设定工艺条件提取(温度：40℃，时间：50min，功率：250W)。提取后抽滤，滤液转移到500mL容量瓶中。茶叶残渣用40℃，100mL蒸馏水超声提取5min，过滤，合并滤液，待容量瓶内溶液冷却后，加蒸馏水至刻度，震荡，摇匀，得茶多酚提取液。

3、没食子酸标准液的配制

在电子分析天平上称取0.0145g没食子酸标准品于烧杯中，溶解，转移至50mL容量瓶中，加入蒸馏水稀释至刻度。震荡摇匀后得没食子酸储备液，此时没食子酸储备液的浓度为290μg·mL^-1。分别移取没食子酸储备液0mL、1mL、2mL、3mL、4mL、5mL于25mL容量瓶中，摇匀，加蒸馏水稀释至刻度，得到没食子酸标准溶液，其浓度依次为0μg·mL^-1、11.60μg·mL^-1、23.20μg·mL^-1、34.80μg·mL^-1、46.40μg·mL^-1、58.00μg·mL^-1。

4、茶多酚含量的测定

茶多酚含量的测定参照国标法GB／T8313—2018茶叶中茶多酚的检测，具体实验内容如下：移液管分别移取水、没食子酸标准溶液、茶多酚待测液1.00mL于试管中，在每个试管中分别加入5.00mLl0％福林酚试剂，震荡，静置5min，加入4.00mL7.5％碳酸钠溶液，摇匀。室温下反应1h左右，在紫外-可见分光光度计下测定其吸光度。

5、静态吸附-解吸实验

称取已处理过的XDA-5大孔树脂3g(精到0.0001g，湿重)，倒入50mL烧杯中，加入10mL按在分析天平上称取茶叶末25g(精确到0.001g)置于烧杯中，加入250mL40℃预热的蒸馏水，搅拌、摇匀。将烧杯放入数控超声清洗器中按照设定工艺条件提取(温度：40℃，时间：50min，功率：250W)。提取后抽滤，滤液转移到500mL容量瓶中。茶叶残渣用40℃，100mL蒸馏水超声提取5min，过滤，合并滤液，待容量瓶内溶液冷却后，加蒸馏水至刻度，震荡，摇匀，得茶多酚提取液的茶样提取液，保鲜膜密封，室温下静置24h，次日抽滤，滤液转移至100mL容量瓶中，加蒸馏水定容，得吸附后待测液；将抽滤后的树脂置于100mL烧杯中，加入70％乙醇50mL解吸，磁力搅拌器搅拌2h，抽滤，取lmL解吸液转移至25mL容量瓶中，加蒸馏水定容，得解吸后待测液。

6、动态吸附-解吸实验

称取湿重为5g(精确到0.0001g)的XDA-5树脂，以10mL茶多酚提取液上柱，以1mL／min的流速过柱，收集流出液，定容至100mL容量瓶中，得吸附后待测液；将吸附茶多酚的树脂柱加30mL70％的乙醇进行解吸，以1mL／min的流速过柱，收集解吸液，定容至250mL容量瓶中，得解吸后待测液。

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