HPLC同时测定和胃降逆胶囊中的大黄素和齐墩果酸

目的采用HPLC法同时测定和胃降逆胶囊中大黄素和齐墩果酸的含量。方法采用AgilentZorbaxSB-C18色谱柱（250mm×4.6mm，5μm），流动相为甲醇-0.1mol·L-1磷酸溶液（85∶15），梯度洗脱，流速1mL·min-1，检测波长210nm。结果大黄素和齐墩果酸的峰面积与进样量间的线性关系良好，r均超过0.9993，RSD不超过2%，平均回收率均大于95%。结论所用方法重复性好、回收率高，适用于和胃降逆胶囊的质量控制。

和胃降逆胶囊为临床常用中成药，主要由朱砂七、天仙藤、赭石、老龙皮、楤木、蒲公英等药材组成，具有活血理气、清热化淤、和胃降逆的功效。处方中的朱砂七是“太白七药”中的名贵品种，主治“七劳五伤”；天仙藤具有活血止痛、利水消肿，解毒的功效；赭石可以用于胃气上逆呕吐、呃逆、噫气；楤木可发挥镇痛、抗炎、护肝等药理作用；而老龙皮具有抗氧化作用；蒲公英则具有抗肿瘤、抗氧化的功效。和胃降逆胶囊在临床上主要用于治疗多种胃炎、胃食管反流等，与其他药物联用也可治疗食欲不振

。参考课题组对于其他处方中成分的含量测定，现采用HPLC法同时测定和胃降逆胶囊中大黄素和齐墩果酸两种有效成分的方法，有利于和胃降逆胶囊的质量控制。

1实验部分

1.1仪器与试药

LC-20AT型高效液相色谱仪、ΜV-1750型紫外分光光度计。大黄素、齐墩果酸对照品（110756-201512、110709-201607）；和胃降逆胶囊方中所有药材；和胃降逆胶囊（自制，规格：0.4g）；水为纯化水；甲醇、磷酸为色谱纯；其余试剂为分析纯。

1.2方法与结果

1.2.1色谱条件

采用AgilentZORBAXSB-C18色谱柱（250mm×4.6mm，5μm），流动相为甲醇-0.1mol·L-1磷酸溶液，梯度洗脱（0～15min、30%～85%甲醇，15～30min、85%甲醇），检测波长210nm，流速为1mL·min-1，柱温为室温，进样量10μL。

1.2.2溶液的制备

参照2015年版《中国药典》中一清胶囊项下大黄的测定方法制备供试品溶液。取4粒样品内容物，研细混匀，取约1.0g，精密称定，加20mL甲醇，混匀，静置30min，滤过，滤液蒸干，残渣加10mL2.5mol·L-1硫酸溶液，超声处理（250W，50kHz）5min，转移至100mL锥形瓶中，再加15mL三氯甲烷，于70℃水浴上加热回流30min，冷却，转移至分液漏斗中，分取三氯甲烷液，用三氯甲烷加热回流酸液（10mL×2），每次20min，分取三氯甲烷液，酸液再用10mL三氯甲烷振摇提取，合并三氯甲烷液，蒸干，甲醇溶解残渣，转移至50mL量瓶中，加甲醇定容，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。

分别对供试品溶液制备过程中的水解时间和提取次数进行了验证，以峰面积与取样量比值为评价指标，比值越大，说明水解越完全，提取越彻底。结果水解30min和提取2次后，峰面积与取样量的比值不再增加，说明已经水解和提取完全，结果与《中国药典》中的方法一致。分别精密称取0.5mg大黄素、0.7mg齐墩果酸对照品，置小烧杯中，加甲醇溶解，超声30min，使彻底溶解，冷却至室温，转入10mL量瓶中，加甲醇定容，制得大黄素、齐墩果酸终浓度分别为50、70μg·mL-1的混合对照品溶液。按照处方制备不含老龙皮、楤木和朱砂七的阴性样品，按上述方法操作，即得不含相关药材的阴性对照溶液。

1.2.3专属性的试验

分别取供试品、对照品和阴性对照溶液，在“1.2.1”项色谱条件下分别进样，记录色谱图。阴性样品在大黄素与齐墩果酸色谱峰相应的位置上未检出色谱峰，表明处方中其他药材的成分不会干扰测定（图1）。

1.2.4线性关系的考察

吸取3、6、9、12、15、18μL含大黄素与齐墩果酸的混合对照品溶液，进样测定。以进样量为横坐标、峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得大黄酸、齐墩果酸的回归方程为：Y1=2.0706×103X-2.6883×105（r2=0.9997）、Y2=947.08X-1.6826×105（r2=0.9998），线性范围分别为0.1533～0.9198、0.2133～1.2798μg。

1.2.5精密度、稳定性、重复性的考察

分别精密取10μL大黄素、齐墩果酸混合对照品溶液进样，共6次，记录峰面积，计算得大黄素、齐墩果酸峰面积的RSD分别0.80%、0.82%，表明精密度良好。取供试品溶液，分别在0、2、4、6、8、10h时测定峰面积，计算得大黄素、齐墩果酸峰面积的RSD分别0.50%、0.80%，表明供试品溶液在10h内稳定性较好。取同一批样品共6份，按“1.2.2”项方法制成供试品溶液，分别精密量取10μL进样，记录峰面积，按外标法计算样品中大黄素和齐墩果酸的含量。6次含量测定的平均含量分别为2.944、4.099mg·g-1，RSD分别为1.65%、1.73%。

1.2.6加样回收率的考察

取同一批样品，共6份，每份约0.5g，精密称定，分别精密加入44.6μg·mL-1大黄素、296μg·mL-1齐墩果酸对照品溶液1mL，分别按“1.2.2”项方法制备供试品溶液，取10μL进样，记录峰面积，按外标法计算样品中大黄素和齐墩果酸的含量并计算回收率（表1）。回收率和RSD均在合理范围内，符合含量测定的要求。

1.2.7样品的含量测定

取3批和胃降逆胶囊，按“1.2.2”项方法制备供试品溶液，分别进样测定，记录峰面积，通过外标法计算大黄素和齐墩果酸的含量。3批样品中，每粒分别含大黄素1.18、1.18、1.19mg、齐墩果酸1.63、1.63、1.64mg。

2讨论

朱砂七是和胃降逆胶囊中的主药，其主要有效成分是大黄素，而老龙皮和楤木是辅药，其主要有效成分都含有齐墩果酸，因此，选择大黄素和齐墩果酸作为含量测定的指标。大黄素是一种蒽醌衍生物，而齐墩果酸属于三萜皂苷，二者皆可溶解于甲醇中，都具有酸性，酸化滤液残渣后酸性物质以游离形式存在，再用三氯甲烷回流，大黄素和齐墩果酸会进入氯仿层，分取有机层，重复多次操作，则可充分提取样品中的大黄素和齐墩果酸。对大黄素和齐墩果酸在200～400nm扫描，在210nm处大黄素和齐墩果酸均有强吸收，因此，设定210nm为检测波长。文中所用方法操作简单、结果准确可靠，可更好地控制和胃降逆胶囊的质量。

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