固相萃取-高效液相色谱-质谱联用检测牛奶中地塞米松残留（二）

（三）前处理方法的对比验证

据文献报道，正己烷脱脂法[20]是将待净化滤液以正己烷脱脂，定容过膜后上机检测，相较于固相萃取法，在保证检测结果准确性的前提下，可有效节约样品前处理时间和试验成本。为验证正己烷脱脂法和固相萃取法的差异，选取阴性牛奶样品，在加标浓度5μg/kg下，分别按照文献中的正己烷脱脂法和本试验中的固相萃取法对样品进行前处理后上机检测，结果如图2所示。

由图2中2种前处理方法加标检测结果质谱图对比可知，在相同加标浓度下，正己烷脱脂法检测结果存在明显的杂峰干扰，且目标峰强度相对较低；而固相萃取法检测结果目标峰峰型尖锐对称，响应强度高，杂峰干扰小，更有利于定量分析。另外，在前处理过程中发现，正己烷脱脂法在脱脂后，滤液呈白色浑浊状态，过滤膜时阻力较大，说明存在大颗粒杂质，上机液呈白色半透明状，存在阻塞管路、污染离子源的可能；而固相萃取法定容后的滤液和过滤膜后的上机液均澄清透明，更有利于对仪器的保护。虽然正己烷脱脂法可在一定程度上节约时间和试验成本，但从峰型、响应强度和仪器安全风险角度考虑，选择固相萃取法更为可靠。

（四）标准曲线绘制和精密度试验

在痕量分析中，样品前处理过程常常伴随着目标物的损失，影响分析结果的准确性，同位素内标法可有效降低这一影响，但同位素内标往往价格昂贵，大幅提高了试验成本。因此，采用两种方式进行定量。方式1采用外标法，参考农业部1031号公告-2-2008标准[19]要求，准确移取地塞米松标准储备液，以20%乙腈水溶液稀释，配制成浓度为1、2、5、10、50 ng/m L的系列浓度标准工作液；方式2采用标准加入法，按照本试验所述标准溶液的配制步骤操作。将两组标准工作液上机检测，以目标化合物峰面积（Y）与浓度（X）进行线性回归，绘制标准曲线，结果见表2。

由表2可知，两种标准曲线绘制方式的线性关系良好，但各浓度点峰面积差别较大，方式1是方式2对应标准浓度点峰面积的3～5倍，表明受样品前处理过程的影响，目标物损失较为明显。为进一步验证两种标准曲线绘制方式的适用性，在线性范围内选择0.5、2.5、5.0μg/kg水平加标浓度（每个浓度点平行测定6次），按照本试验所选择的固相萃取法进行前处理后上机检测，分别代入上述两条标准曲线进行线性拟合，考查回收率和相对标准偏差，结果见表3。

由表3可知，3水平加标检测结果代入方式1所绘制的标准曲线中，平均回收率<20%,RSD>10%，无法满足实验要求；代入方式2所绘制的标准曲线中，平均回收率在65.7%～85.7%,RSD<10%，满足农业部1031号公告-2-2008标准[19]中关于地塞米松在牛奶样品中的回收率（50%～120%）及精密度（<20%）要求。因此，选择标准加入法定量结果更为准确。

（五）方法定量限和检出限

准确移取稀释后的地塞米松标准贮备液逐级递减添加到空白样品中，按照上文选择的固相萃取法和条件进行处理和分析，以10倍信噪比作为定量限，如图3所示，加标浓度为0.25μg/kg可作为地塞米松在牛奶中的定量限，依据定量限为3倍检出限原则，得到方法检出限约为0.08μg/kg，满足农业部1031号公告-2-2008标准[19]中关于地塞米松在牛奶样品中的灵敏度（定量限0.2μg/L）要求。

（六）样品检测

抽取当地中小学的牛奶样品14份，采用本方法对其地塞米松残留进行测定，与农业部1031号公告-2-2008标准中的检测方式和定量方法相比，可有效节约试验成本，提高分析准确度。结果均未检出地塞米松残留，满足食品安全国家标准关于牛奶中地塞米松最大残留限量的要求。

三、结论

本研究通过简化农业部1031号公告-2-2008标准中的流动相组合，缩短分析时间，优化质谱参数，对比两种样品前处理方法，改进标准曲线绘制方式，建立了检测牛奶中地塞米松残留的固相萃取-高效液相色谱-质谱联用分析方法。该方法经济、简便、可靠，能够满足实验室对批量牛奶样品中地塞米松残留的检测要求。

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