优化气相色谱法测定酱油中对羟基苯甲酸酯类含量的方法（三）

3、仪器重现性试验

定量测定应考虑仪器的重现性，评价多次重复测定同一均匀样品所得结果之间的接近程度。取一定浓度的标准溶液1.0μL，连续进六针，记录保留时间和峰面积，计算其保留时间和峰面积的相对标准偏差，结果见表4至表5。

由试验结果可以看出对羟基苯甲酸酯类的保留时间和峰面积的RSD分别是：对羟基苯甲酸甲酯为0.02%和0.6%、对羟基苯甲酸乙酯为0.02%和0.6%、对羟基苯甲酸丙酯为0.01%和0.7%。

对羟基苯甲酸丁酯为0.02%和0.8%说明本实验室的仪器稳定性良好，适用于酱油中对羟基苯甲酸酯类的测定。

4、灵敏度试验

称取5g样品，并加入30μL浓度约100μg/mL的对羟基苯甲酸酯类标准溶液，称取5g试样于250mL分液漏斗中，依次加入10mL饱和氯化钠溶液，1mL50%盐酸酸化，摇匀，分别以75mL、50mL、50mL无水乙醚提取三次，每次2min，放置片刻，弃去水层，合并乙醚层于250mL分液漏斗中，加入10mL饱和氯化钠溶液洗涤一次，再分别以碳酸氢钠溶液30mL、30mL、30mL洗涤三次，弃去水层。用滤纸吸去漏斗颈部水分，将有机层经过无水硫酸钠（约20g）滤入浓缩瓶中，在旋转蒸发仪上浓缩近干，用氮气除去残留溶剂，准确加入2.0mL无水乙醇溶解残留物，供气相色谱用，按上述处理的方法进行处理，信噪比≥3，得方法检出限，结果图下。

结果表明，对羟基苯甲酸酯类（对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯）的方法检出限均达到相关标准的要求。

（5）加标回收率试验

称取已知对羟基苯甲酸酯类含量的酱油样品约5g，共3份，分别加入140μL、400μL，浓度约为100μg/mL和200μL浓度约为1000μg/mL的混合标准溶液，按1.2.3制备样品溶液，记录峰面积，计算对羟基苯甲酸酯类的回收率及RSD，结果见表7～表10。

结果表明，对羟基苯甲酸酯类（对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯与对羟基苯甲酸丁酯的回收率在91%～103%之间、其RSD在0.2%～0.8%之间，均符合要求（回收率90%～110%，RSD≤10%）。

三、结论

中华人民共和国卫生部颁布的GB5009.31-2016《食品安全国家标准食品中对羟基苯甲酸酯类的测定》，采用的色谱柱为弱极性石英毛细管柱，柱固定液为（5%）苯基-（95%）甲基聚硅氧烷，即相当于本研究中的InertCap5，根据研究，该色谱柱的固定相与目标物结合并不是很强，灵密度没法更好的体现。目前比较多的学者用质谱检测对羟基苯甲酸酯类的含量，如王颖等就液相串联质谱测定含烟中对羟基苯甲酸酯，但是由于质谱所需成本比较高，不是每个实验室都有能力进行配备，尽管也有学者利用气相色谱法对对羟基苯甲酸酯类进行研究，但是针对酱油中对羟基苯甲酸酯类的研究较少。因此本研究通过优化气相色谱仪的分析条件后，可明显提高酱油中对羟基苯甲酸酯类的含量的灵密度。

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