一、分析意义

维生素广泛存在于各种生物体中，其种类繁多，化学结构与生理功能各异。因此无法按照结构或功能分类，按其溶解性可分为脂溶性(V_A、V_D、V_E、V_K)和水溶性(V_B1、V_B2、V_B6 、V_B12、 V_P、V_PP、 V_C)两大类。维生素是人体生命活动不可缺少的营养物质，它们一般在动物和人体内不能合成或合成数量少，满足不了动物和人体的需要，必须依靠从食物中摄取。在食物中缺乏了任何一种维生素，人和动物都会发生特有的缺乏症状，如缺乏维生素A,B和C时，可分别引起夜盲症、脚气和坏血病等，严重时足以致命。某些维生素含量的高低，是评价农产品品质的重要指标之一。

二、方法选择的依据

测定维生素是一项比较复杂的工作。一般测定程序是:①用酸、碱或酶分解试样，使其中的维生素游离出来;②用溶剂进行提取;③分离干扰物质，对样液进行分离提纯;④用适当的方法进行定量等。测定维生家的方法有微生物学测定法、生物学测定法等;仪器分析的方法有分光光度法、荧光分析法、薄层层析法、高效液相色谱法等。选用方法时应根据试样的品种、类型、待测维生素的性质、含量以及干扰物质多少等因素来决定。下面主要介绍维生素C的测定。

维生素C又称抗坏血酸，其纯品为白色无臭结晶，熔点为190^oC～192^oC,溶于水或乙醇中，不溶于油剂，在水溶液中易被氧化，在碱性条件下易分解，在弱酸条件下较稳定。还原型(L-抗坏血酸)可被氧化为氧化型(L-脱氢抗坏血酸)，但仍有一定的生理作用，如果进一步水解则生成2,3-二酮古乐糖酸，便失去生理作用。通常所说的总抗坏血酸包括还原型、氧化型抗坏血酸和2,3-二酮古乐糖酸。

测定Vc含量的方法有2,6-二氯靛酚法、2,4-二硝基苯肼法、铅-硫化氢法、碘量法、以及荧光分光光度法。2,6-二氯靛酚法用于测定还原型Vc，其它方法多用于测定总Vc的含量。

三、还原型维生案C的测定((2,6-二氯靛酚滴定法)

1、方法原理

还原型抗坏血酸的分子中有烯二醇结构（ ）存在，因此具有还原性，它能将蓝色染料2，6-二氯靛酚还原为无色的化合物，而Vc则被氧化为脱氢Vc，反应式如下：

2,6-二氯靛酚具有酸碱指示及氧化还原指示的两种特性，在碱性介质中呈深蓝色，而在酸性介质中呈浅红色(变色范围pH4～pH5)，其于氧化态时呈深蓝色(碱介质中)或浅红色(酸性介质)，还原态时为无色。根据这个特性，用碱性蓝色染料的标准溶液滴定植物样品酸性浸出液中Vc到刚变浅红色为终点，由染料的用量即可计算Vc的含量。滴定终点的红色是刚过量的未被还原的（氧化型）染料溶液在酸性介质中的颜色。

通常，人们在浸提和测定Vc都是在草酸溶液〔p(H₂C₂O₄·2H₂O)=20g·L^-1]中进行的，目的是保持反应时一定的酸度，避免Vc在高pH时被空气氧化。由于此染料不能氧化待测液中非Vc的还原性物质，所以，对Vc有一定的选择性。

本法适用于测定一般水果、蔬菜样品的还原型Vc(不包括脱氢Vc)。如试样中含有Fe ²⁺,

Sn²⁺,Cu²⁺,SO₃^2-、S₂O₃^2-、SO₂等还原性杂质，则有干扰。

2、主要仪器

高速组织捣碎机(8000r·min^-1～12000r·min^-1);电动离心机(4000r·min^-1);半微量滴定管。

3、试剂

（1）草酸溶液［p(H₂C₂O₄·2H₂O)=20g·L^-1］:称取草酸(H₂C₂0₄·2H₂0，化学纯)20g溶于水中，稀释至1L,贮于避光处；

（2）碘化钾溶液〔p(KI)=60g·L^-1]:60g碘化钾(KI，化学纯)溶于水，稀释至1L;

（3）淀粉指示剂:lg可溶性淀粉溶于100mL沸水中;

（4）碘酸钾标准液[c(K10₃)=0.001mol·L^-1]:称取在105^oC供过2h的碘酸钾(KIO₃，优级纯)1.784g溶于水，定容至500mL。此为 贮备液。使用时将此贮备液用煮沸并冷却的水稀释100倍。即成标准溶液。大约线星期应稀释配制一次；

（5） Vc标准溶液:称取Vc(C₆H₈O₆，分析纯)0.020g溶于草酸溶液中(试剂1)，并用草酸稀释至100mL，此液约含Vc0.2g·L^-1，置于冰箱中保存。临用当天进行标定。

Vc的标定:吸取Vc液5.00mL于50mL三角瓶中，加入草酸溶液(试剂1)10mL,碘化钾溶液(试剂2)0.5mL,淀粉指示剂5滴，用碘酸钾标准液(试剂4)滴定至溶液突变为浅蓝色为止(约需滴定11mL)，计算Vc的准确浓度:

式中:p(C₆H₈O₆)——标定出的Vc标准溶液浓度，g·L^-1；

c——碘酸钾溶液物质的的浓度( KIO₃,mol·L^-1);

V₁——所用磺酸钾溶液的体积，mL;

V₂——吸取Vc溶液的体积,mL;

6.2,6-二氯靛酚溶液:称取2,6-二氯靛酚(C₁₂H₇NO₂C1₂，分析纯)0.050mg溶于约200mL含有碳酸氢钠(NaHCO₃，分析纯0.052mg的温水中(＜40^OC)，冷却后用水稀释至250mL。用玻璃滤器或折叠滤纸过滤于棕色瓶中，保存在冰箱中。使用前，待溶液恢复至室温后，用Vc标准溶液标定其准确浓度。在冰箱中保存时，每周标定一次。

标定方法:吸取已标定的Vc标准溶液5.00mL(含Vc约1mg)于50mL三角瓶中，加入草酸溶液10mL，摇匀，用2,6-二氯靛酚溶液滴定至溶液呈浅红色，约在15s不褪色为止（约约0.1mgVc·mL^-1）:

式中:P——所用Vc标准液的浓度(mg/mL);

V₁——吸取Vc标准液的mL数。

V₂——所用2,6-二氯靛酚溶液的mL数。

参考资料：土壤农业化学分析方法