植物检测试剂盒样本处理方式

植物检测试剂盒样本处理：

取新鲜植物组织，清洗干净，擦干，剪碎，迅速称取， 按照20mg重量加入1ml Pro裂解液的比例加入Pro裂解液（建议使用1.5ml螺口离心管或锁盖离心管），沸水浴或干浴处理20分钟 (期间间歇混匀)，10000rpm离心 2分钟，上清即为脯氨酸提取液，4℃保存备用。待测提取液如不能及时测定，应置于-20℃保存，1-2天内稳定。

植物检测试剂盒操作步骤：

一、粗酶液提取：

按照质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g，加入 1mL 提取液）加入提取液，室温匀浆后于 25℃，12000g 离心 10min，取上清待测。

二、测定步骤：

1、 分光光度计预热 30min 以上，调节波长 570nm，蒸馏水调零。

2、 将 1000μg/mL 氮标准液用提取液分别稀释为 200、100、50、25、12.5μg/mL。

3、 操作表：

混匀后盖紧瓶盖封口膜封口（防止水分散失），置于沸水浴中保温 10 min，冷却后反复颠倒 EP管数次，将测定管 8000rpm 离心 5min 后取上清，于 570nm 测定吸光值。显色后务必在 30min 内测完。计算△A=A 测定管-A 空白管，△A 标准=A 标准管-A 空白管。

三、植物氨态氮含量计算：

1、标准曲线的绘制

以各个氮标准液为横坐标，其对应的△A 标准为纵坐标，建立标准曲线，得到标准方程 y=kx+b，将△A 带入方程中，得到 x (µg/mL)

2、NH3-N 含量的计算

（1）按样本鲜重计算

NH3-N 含量（µg /g FW）=x×V 提取÷W= x÷W。

（2）按蛋白浓度计算

NH3-N 含量（µg/mg prot）=x×V 提取÷（Cpr×V 提取）= x÷Cpr。

W：样品质量，g；

Cpr：蛋白浓度，mg/mL；

V 提取：样品提取液总体积，1mL。