朝鲜蓟茎叶中脂溶性提取物对神经细胞的保护作用（二）

2 结果和讨论

2.1 朝鲜蓟副产物的中萜类及甾醇类化合物

倍半萜烯类化合物及三萜是朝鲜蓟中主要的亲脂类化合物。倍半萜烯类化合物主要集中分布在叶片中，在茎干以及花蕾中含量较少，相反，三萜类化合物在叶片中含量较低。本试验共鉴定出13种萜类及甾醇类化合物，其中包括3种倍半萜内脂、2种甾醇及8种五环三萜(表1)。

由表1可知，朝鲜蓟副产物中愈创木烷型倍半萜内脂主要包括菜蓟苦素、去酰基菜蓟苦素和大海米菊素。菜蓟苦素是朝鲜蓟副产物中主要的倍半萜内脂，也是朝鲜蓟中一种主要的苦味成分，被视为朝鲜蓟类植物的化学分类标志，在朝鲜蓟中含量高达13309.10mg/kgDM，占总萜类及甾醇类化合物的64.90％，占总倍半萜内脂的82.18％。研究表明菜蓟苦素具有抗光老化、抗痉挛、抗高血脂等药理作用。

朝鲜蓟茎叶副产物中豆甾醇含量为264.67mg/kgDM，β-谷甾醇含量为586.67mg/kgDM，均属于甾醇类化合物。植物甾醇是一种天然的植物活性物质。是植物细胞膜的组成部分，具有较强的抗炎、降低胆固醇及预防动脉粥样硬化等功效，而β-谷甾醇在减少血清胆固醇吸收方面作用显著，在减少冠心病及控制肿瘤生长方面起着重要作用。

五环三萜类物质是朝鲜蓟副产物脂溶性提取物中含量较高的一类，占总萜类及甾醇类化合物的16.88％，其结构主要分为羽扇豆烷型、蒲公英甾烷型和齐墩果烷型。其中，蒲公英甾烷型含量最高。占五环三萜总含量的58.93％。并且其两种醋酸酯衍生物的总量为1184.08mg/kgDM，高于蒲公英甾醇和皿蒲公英甾醇的总量(855.53mg/kgDM)，蒲公英甾醇和皿蒲公英甾醇及其醋酸酯衍生物曾在朝鲜蓟的花蕾中检测出。具有显著的抗炎活性；羽扇豆醇含量为423.06mg/kgDM，Noldin等刚也曾在朝鲜蓟中发现羽扇豆醇，该化合物已被证实具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤、抗关节炎及免疫调节功能嗍。齐墩果烷型五环三萜主要为α-香树脂醇、β-香树脂醇及β-香树脂醇醋酸酯，其中醋酸酯衍生物的含量为535.86mg/kgDM，高于两种醇的含量，这与Romas等在刺菜蓟(栽培型)的不同形态部位中得到的结果一致。Piccolella等在乳香黄连木叶片的提取物中发现了羽扇烷醇、羽扇豆醇、β-香树脂醇、羽扇豆烯酮等萜类化合物，并且其粗提物具有预防或治疗神经母细胞瘤的潜在功能。

2.2 PCI2细胞的细胞活力

利用CCK8法对细胞活力进行检测。细胞存活率受脂溶性提取物质量浓度和处理时间的影响(图1)，低质量浓度(0.25mg/L)下处理PCI2细胞，细胞存活率不受影响；随着脂溶性提取物质量浓度的增加(0.5～2mg/L)，PCI2细胞存活率显著提高，并呈现质量浓度依赖性，其中2mg/L的脂溶性提取物对细胞的保护作用最强，处理24h后，存活率达到138.26％；然而，当利用高质量浓度的脂溶性提取物(8mg/mL)处理细胞时，呈现出明显的质量浓度时间依赖性伤害作用。因此，选择0.5，1，2mg/L3个质量浓度进行后续试验。

与空白对照组相比，90μm01/LH₂0₂处理PCI2细胞4h后，细胞存活率为48.05％(图2)。经脂溶性提取物预处理后，H₂0₂对PCI2细胞的损伤作用受到显著抑制(P＜0.01)，其中2mg/L的脂溶性提取物预处理细胞8h后，细胞存活率达到66.90％,因此在一定质量浓度范围内，脂溶性提取物都可以显著保护PCI2细胞免受H₂0₂的损害作用。

2.3 PCI2细胞的LDH漏出率

为了对脂溶性提取物的保护作用做进一步研究，检测了PCI2细胞的LDH漏出率，即溶解细胞中释放出的乳酸脱氢酶的含量，用该指标评价细胞膜的受损程度。与空白对照组相比，90μmol/LH₂0₂处理PCI2细胞4h后，其LDH漏出率显著增大(P＜0.01)，达到194.69％(图3)；经脂溶性提取物预处理后，PCI2细胞的LDH漏出率与模型组相比有显著降低(P＜0.01)，其中，2mg，L脂溶性提取物预处理细胞8h后，LDH漏出率为110.28％，因此脂溶性提取物可以显著地缓解H₂0₂对神经细胞的损害作用。

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