工业大麻叶对金黄色葡萄球菌的抑菌机制（二）

2 结果与分析

2.1 工业大麻叶不同馏分对S.aureus的抑菌活性

表1显示了不同馏分对S.aureus的最低抑制浓度(质量浓度)。在供试范围内Frl-Fr4对S.aureus无抑菌作用，说明Frl-Fr4馏分内可能不含或含有很少量的活性化合物。Fr5和Fr6对S.aureus的生长有明显的抑制作用，最低抑菌浓度(质量浓度)分别为31.25μg/mL和500μL，其中Fr5的抑菌效果与氨苄青霉素钠的31.25μg/mL相当，此结果与Chakrabortv等的研究结果接近，较柱分离前最低抑菌浓度(质量浓度7.53mg/mL)显著提高，说明抑菌活性成分大部分富集于Fr5馏分。以此为依据，选择n5分析其化学组成并探讨其抑菌机理。

2.2 工业大麻叶Fr5馏分的GC-MS结果

由表2可知，工业大麻叶Fr5馏分，经GC-MS分析，共鉴定出24种化合物，其中包括酯类14个，醇类3个，酚类3个，烯烃类2个。主要成分为亚麻酸甲酯(相对质量分数40.79％)、棕榈酸甲酯(相对质量分数13.12％)、9-顺，11-反-癸二烯酸甲酯(相对质量分数4.55％)。说明工业大麻叶Fr5馏分的抗菌活性可能与酯类、醇类、酚类及其他微量化合物有关，不同成分也可能产生协同效应。

2.3 工业大麻叶提取物的抑菌机理

2.3.1 工业大麻叶Fr5馏分对S.aureus生长曲线的影响

OD_600nm的大小可间接反应细菌的生长情况，图1为添加了0MIC、0.5MIC、1MIC3种质量浓度的Fr5后S.aureus的生长曲线。对照组在培养后快速繁殖，2h进入对数生长期，14h进入稳定期，0D_600nm为1.156±0.029。在0.5MIC处理组，菌液0D_600nm增长缓慢，对数增长阶段被推迟至6h，并于12h进入稳定阶段，OD_600nm为0.427±0.023，说明抑菌作用延缓对数生长进程。减少微生物数量。而当菌液中Fr5质量浓度为1MIC时，曲线平缓，细菌生长被严重抑制，不能进入对数生长期。因此，工业大麻叶Fr5馏分对S.aureus正常生长有抑制作用，且随着药物质量浓度增加，对生长曲线影响增大。

2.3.2 工业大麻叶Fr5馏分对菌体细胞壁的影响

正常情况下AKP存在于细菌的细胞壁和细胞膜之间，当菌体细胞壁被破坏，AKP大量外泄，使培养液中AKP活力升高，因此可通过检测胞外AKP活力的变化问接反映菌体细胞壁完整性例。细菌细胞壁的主要功能是：维持细菌固有形态，保护细菌免受低渗环境侵袭，起到屏障作用。一旦细胞壁功能被破坏，细菌会很快死亡。如图2所示，随着培养时间的增加，对照组AKP活力始终处于相对较低水平，但经过1MIC处理后的菌液，在2h内AKP活力迅速上升至较高水平(0.548±0.039U/L)，之后趋于平稳状态，而0.5MIC处理的AKP活力在8h达到最大值(0.335±0.020U/L)远低于1MIC处理。这表明工业大麻叶Fr5馏分短时间内能有效破坏S勰阳獬细胞壁的完整性。其中1MIC的Fr5对菌体细胞壁完整性的破坏程度较0.5MIC更明显。

2.3.3 工业大麻叶Fr5馏分对细胞膜通透性的影响

细胞膜是菌体的保护屏障。其选择性透过K⁺、Na⁺、H⁺等，可维持适合细菌生存的稳定内环境、胞膜功能、酶活性和菌体正常代谢刚。当细胞膜遭到破坏，通透性增加，内部的电解质会外泄至细胞外，进而使培养液电导率提高，因此菌液电导率的变化反映了细胞膜通透性的变化圜。如图3所示，第0小时，添加抑菌物质的菌液电导率有一定程度的下降，可能是药物与外泄的离子发生了静电结合，从而导致离子浓度降低，电导率下降。随着培养时间的增加，对照组电导率呈现稳定上升的趋势，但变化幅度较小，这可能是菌液中菌体浓度增加和正常的裂解所致。当加入工业大麻叶Fr5后，在短时间内菌液电导率明显高于对照组(P＜0.05)，尤其是1MIC工业大麻叶提取物作用后2h，培养液电导率提高12％。这说明工业大麻叶Fr5可对S.aureus细胞膜造成损伤。且损伤程度与Fr5的浓度呈正相关关系。

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