超高效液相色谱-串联质谱法同时测定鸡肉和鸡蛋中25种兽药残留（三）

2.2色谱和质谱条件的优化

2.2.1色谱条件的优化

多种兽药残留检测的流动相一般采用甲醇或乙腈为有机相，实验按1.5.1节洗脱程序对25种药物和7种内标物进行测定。结果表明，以乙腈为有机相时，部分药物或内标物响应比甲醇低，回收率也比甲醇差，所以选择甲醇为流动相的有机相。

H⁺能促进Q1四极杆内[M+H]⁺峰的形成，增加化合物在正离子模式下的离子化效率、分离度和响应强度；乙酸铵能提高化合物响应，改善部分药物的峰形。本实验在文献的基础上，考察了含不同浓度甲酸、乙酸铵的水-甲醇溶液作为流动相的分离效果。结果表明，当使用0.1%甲酸水(含0.1mmol/L乙酸铵)-甲醇溶液时，大多数药物的峰形、分离度和峰响应强度均最佳，但诺氟沙星的回收率大于120%，磺胺噻唑和磺胺甲噻二唑的回收率小于70%。经与药物标准品峰对比发现，样品中诺氟沙星-D5、磺胺噻唑和磺胺甲噻二唑的峰面积远远低于标准品。向甲醇中加入甲酸，随着甲酸浓度的增加，上述3种药物的峰面积逐渐增大，磺胺噻唑和磺胺甲噻二唑的回收率逐渐升高，诺氟沙星回收率降低。但由于正、负离子模式电离原理的区别，甲酸的加入会抑制负离子模式下化合物电离，导致峰响应值降低。为兼顾正、负离子模式同时测定时各药物的回收率与灵敏度，确定当流动相为0.1%甲酸水(含0.1mmol/L乙酸铵)-0.2%甲酸甲醇时，25种药物回收率均达到最佳，批内、批间样品中各药物重复性最优，且氯霉素类检出限均低于GB/T20756—2006要求。优化后的实验条件测定兽药混合溶液MRM色谱图示于图2。虽然大多数兽药峰重叠，但分别提取离子对后各物质峰形良好。

2.2.2质谱条件的选择

通过针泵以流动注射的方式对1.3节配制的标准溶液进行分析，为每个待测药物选取响应较高的2对离子对，为内标物选取响应最高的1对离子对，并优化相应的去簇电压和碰撞能作为最初的质谱参数。但在实际样品测试中，环丙沙星-D8响应最高的离子对峰受杂质峰的干扰严重，无法准确积分。以鸡蛋为例，其质谱图示于图3a，部分样品中杂质峰与恩诺沙星响应最高的离子对峰完全重叠，造成离子比率远远超出允许偏离范围，二者对定性和定量结果均有极大影响，通过调整流动相难以将杂质与目标物分离。因此，在满足灵敏度需求的前提下，对恩诺沙星优化出第三高响应离子对，环丙沙星-D8优化出次高响应离子对，示于图3b，相关参数列于表1。

2.3方法学评价

2.3.1线性范围和检出限

根据每种药物在仪器上的灵敏度，以空白样品提取液作为溶剂，将4类药物配制成一系列质量浓度混合标准工作溶液，在优化的实验条件下测定，以药物峰面积与内标物峰面积比值(y)对被测组分的质量浓度(x)作图，确定25种药物的线性方程。在空白样品中加入系列低浓度25种兽药标准液，分别以3倍和10倍信噪比(S/N)确定检出限和定量限，列于表3。25种兽药在0.2～250μg/L浓度范围内的线性关系良好(相关系数r>0.99)，检出限和定量限分别为0.1～0.9μg/kg和0.3～3.0μg/kg。

2.3.2回收率和精密度

根据混合标准溶液的浓度，分别添加约1倍(低)、5倍(中)、20倍(高)定量限浓度的25种标准溶液于鸡蛋和鸡肉阴性样品中，每个样品基质做6次平行实验，计算平均回收率及相对标准偏差，结果列于表4。4类兽药的平均回收率为79.5%～119%，相对标准偏差为0.9%～9.2%。

2.4实际样品检测

使用本方法检测实验室采集的5份鸡蛋和5份鸡肉样品，以验证方法的可行性和准确性。结果表明，有1份鸡蛋中恩诺沙星含量为3.20μg/kg，氟甲砜霉素含量为31.0μg/kg，另有1份鸡蛋中金刚烷胺含量为1.80μg/kg；有1份鸡肉中恩诺沙星、环丙沙星、氧氟沙星含量分别为11.3、4.5、14.7μg/kg。采用GB/T21312—2007标准方法检测，鸡蛋中恩诺沙星含量为3.34μg/kg，鸡肉中恩诺沙星、环丙沙星、氧氟沙星含量分别为11.1、4.2、15.5μg/kg；采用SN/T4253—2015标准方法检测，鸡蛋中金刚烷胺含量为1.5μg/kg；采用GB/T20756—2006标准方法检测，鸡蛋中氟甲砜霉素含量为28.1μg/kg。其他药物定性结果与标准方法一致，表明本方法准确性较好。

3结论

本实验根据样品基质的特点和4类兽药的性质，对前处理方法及仪器分析方法进行了优化，建立了同时提取净化，超高效液相色谱-串联质谱法正、负离子模式同时扫描测定鸡蛋、鸡肉中4类25种兽药残留。该方法前处理简便、高效、回收率高、重复性好、成本低，一次测定即可完成4种标准方法才能完成的工作量，且对阳性样品的检出结果与标准方法得到的结果一致，对多种类兽药的检测具有借鉴意义，可为实验室日常检测、禽类产品质量安全隐患排查及政府监管提供技术支持。

声明：本文所用图片、文字来源《云南渔业科学院》，版权归原作者所有。如涉及作品内容、版权等问题，请与本网联系删除

相关链接：环丙沙星，磺胺噻唑，甲酸