气相色谱-质谱法测定食品中的3-乙酰基-2，5-二甲基噻吩（一）

3-乙酰基-2，5-二甲基噻吩(3-Acetyl-2，5-dimethylthiophene，ADP)是一种可以作为咸味香精的食品添加剂，具有烧烤、坚果的气味，常用于肉类食品加工中。于2002年开始作为食品用香料使用。目前，ADP作为允许使用的食品用香料收录在GB2760-2014附录B中。2013年欧洲食品安全管理局公布了对该物质重新评估的意见，认为其在体内和体外试验均表现出致突变性，作为食品用香料使用存在安全问题，将其从食品用香料法规附录Ⅰ食品中香料清单中删除。同年8月14日，中国香精香料化妆品工业协会发布了香料香精行业自律文件，规定香料生产企业不得生产用作食品用香料的3-乙酰基-2，5-二甲基噻吩，食品用香精生产企业调整配方，不得再使用该物质。ADP分子式见图1。

目前对ADP的检测在国家标准及行业标准中尚属空白，针对该物质的定量分析研究开展的也不多。现有的文献方法有气相色谱-质谱法(GC-MS)、气相色谱串联质谱法（GC-MS/MS)、高效液相色谱法（HPLC)。气相色谱串联质谱法抗干扰能力强、灵敏度高，但其操作较为复杂，成本高，技术难度较高，使用普及性较差﹔而高效液相色谱法分离效率高、检测灵敏度高，但定性效果差，容易受到杂质、基质等因素的干扰。气相色谱-质谱法定性效果较好，准确度、灵敏度高，普及范围广。

此外，现有文献中报道的ADP检测基质一般为香精香料类食品添加剂，文献报道常用正庚烷、正己烷、无水乙醇直接提取，而由于食品基质复杂，目标物镶嵌其中，基质干扰会对ADP的检测产生影响。

本文以ADP为研究对象，以气相色谱-质谱技术为检测手段，针对含油脂食品、不含油脂食品分别采用不同的前处理方法，建立了简单、高效的定性和定量检测食品中ADP的分析方法。

一、实验部分

1、仪器与试剂

气相色谱-质谱仪（TRACE1310-TSQ8000)﹔美国赛默飞世尔科技公司，电子分析天平(SQP)：北京赛多利斯﹔超纯水机（IQ7000，Mili-Q)﹔涡旋混合器(UMV-2)：山东青云实验耗材有限公司；超声清洗机(KQ-800DE)：昆山市超声仪器有限公司；高速离心机（3-18KS)：德国Sigma。甲醇、正己烷均为色谱纯：德国默克，3-乙酰基-2，5-二甲基噻吩标准品（纯度97.3%)：美国CATO公司。

2、前处理方法

（1）含油脂的试样

膨化食品、火锅底料或含油调味酱、肉制品等。

准确称取试样5.0g（精确至0.01g)于15mL离心管中，准确加入10mL甲醇，涡旋2min，超声提取15min，4000r/min离心2min，收集上清液。-20℃冰箱冷冻2h，滤纸过滤后供气相色谱-质谱分析。

（2）不含油脂的试样

食品添加剂、水溶性香精、调味料（酱)、香辛料、方便面调味包等。

准确称取试样5.0g（精确至0.01g)于50mL离心管中，加入5mL蒸馏水，涡旋混匀，再准确加入10mL正己烷，涡旋2min，超声提取15min，4000r/min离心2min，取上清液，供气相色谱―质谱分析。

3、仪器条件

（1）气相色谱条件

TG-WaxMS毛细管柱(30m×0.25mm×250um)，柱温度程序：50℃保持1min，20℃/min升温至200℃保持3min，25℃/min升温至240℃保持7min；进样口温度：240℃﹔进样模式：不分流；载气：氦气，流速：1mL/min。

（2）质谱条件

为电子轰击离子源，EI，70eV；离子源温度：300℃﹔四级杆温度：280℃﹔传输线温度：280℃﹔溶剂延迟：7.5min。

二、结果与讨论

1、提取方式的考察

食品中大多数为水、脂肪类化合物、有机酸、芳香经类等混合物，样品基质成分与提取溶剂之间存在着吸附竞争。ADP不溶于水，易溶于甲醇、乙醇等有机溶剂，可以依靠有机溶剂萃取的方法，而应用超声波萃取可提高提取效率，缩短提取时间。因此，本研究采用溶剂萃取和超声波萃取结合的方式，对食品中的ADP进行提取。

2、提取溶剂的选择

（1）含油脂试样

简德威、茅佩卿等人用正庚烷做提取溶剂，徐雪琴等人用正己烷做提取溶剂，提取液经滤膜过滤后上机测定。但对于含油脂的试样来说，提取时油脂会溶解在正己烷、正庚烷中，在色谱分析时大分子油脂的存在会造成基质干扰，降低仪器灵敏度，且油脂的存在会缩短色谱柱的使用寿命造成仪器污染。本文采用甲醇作为提取溶剂，利用ADP在甲醇中易溶而油脂难溶的特性，将ADP从油脂中提取出来，并采用冷冻过滤的方法去除提取过程中的油脂及各类杂质，保证了组分的纯度和质量。甲醇提取法检测快速又节省试剂，且在色谱分析中极少有杂质峰出现，有利于保护色谱柱并延长其使用期限。

（2）不含油脂试样

选择正己烷、异辛烷、正庚烷、二氯甲烷等4种不同极性且毒性较低的常见溶剂。准确称取试样5.0g（精确至0.01g)于15mL离心管中，准确加入10mL甲醇，涡旋2min，超声提取15min，4000r/min离心2min，收集上清液。-20℃冰箱冷冻2h，滤纸过滤后供气相色谱-质谱分析。以回收率考察不同溶剂的提取效果。试验结果表明：正己烷、正庚烷提取效率相当，回收率可达95%以上﹔异辛烷作为提取溶剂时，回收率在80%～90%之间﹔而二氯甲烷提取效率最差，回收率在50%～60%之间。正己烷价格低廉、正庚烷价格略高，综合考虑提取效果及成本因素，因此试验选择正己烷为提取溶剂。结果见图2。

声明：本文所用图片、文字来源《中国食品添加剂》，版权归原作者所有。如涉及作品内容、版权等问题，请与本网联系

相关链接：正庚烷，异辛烷，5-二甲基噻吩，二氯甲烷