Copine-3-增强型绿色荧光蛋白融合蛋白在细胞中的表达和定位（三）

发布时间：2021-06-15 20:06 编辑者：特邀作者余秀梅

在Copines蛋白家族中，Copine-3蛋白最初是在研究白细胞介素2(interleukin-2,IL-2)信号转导实验中，由于Mikbeta1(白细胞介素2受体β链的抗体)的交叉反应活性被偶然发现。Heinrich等发现，在乳腺癌细胞中Copine-3蛋白以Ca2+依赖性方式定位于膜，并与ERBB2相互作用促进肿瘤细胞迁移，Copine-3可能是1个基于人表皮生长因子受体-2(human epidermal growth factor receptor 2,HER2，又称ERBB1)调节肿瘤细胞运动的因子，与肿瘤细胞质膜上ERBB2的激活有关。研究发现,Copine-3蛋白是1个非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)的肿瘤转移促进因子，并与NSCLC的不良预后相关，推测Copine-3与磷酸化酪氨酸蛋白激酶受体和活化的蛋白激酶C1受体(receptor for activated C kinase1,RACK1)相互作用，并激活NSCLC细胞中的黏附斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)信号传导通路，促进非小细胞肺癌迁移和侵袭。Chen等发现，Copine-3蛋白高表达与晚期肝癌患者对索拉非尼治疗的不良预后有关，推测Copine-3蛋白可能参与调控上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)途径，增强索拉非尼抑制肝癌细胞MHCC97-H的迁移和侵袭。这些研究都提示，Copine-3蛋白在生物体内，特别是肿瘤细胞中可能承担着重要的生物学功能。

综上所述，Copine-3蛋白在细胞中承担的生物学功能复杂，与多种肿瘤细胞的迁移或迁徙有关，并可能参与相关信号通路的调控。蛋白质是生命活动的主要承担者，细胞的许多特性和功能都与蛋白相关，而一些功能蛋白具有组织表达特异性。蛋白质的细胞定位与其生物学功能密切相关，特别是在肿瘤细胞中，蛋白的转位入核会导致其功能的改变，进而影响细胞信号转导。研究蛋白定位，对探究其参与相关信号传导及明确信号通路机制有重要作用。研究发现，在T47D和SKBr3细胞中，用离子霉素处理后，利用免疫荧光在细胞核中均检测到了Copine-3蛋白，而对照组细胞(二甲基亚砜处理)中，Copine-3蛋白则主要存在于细胞质中。本课题组在对肿瘤功能蛋白的研究中发现，Copine-3蛋白影响肿瘤细胞的生长和迁移，并参与相关信号通路调控。Copine-3蛋白的转位入核和相关信号通路研究，提示其在肿瘤的发生和发展过程，特别是细胞信号转导中有着重要作用。

我们从HBE细胞中克隆得到编码人Copine-3蛋白的CPNE3基因，构建p EGFP-N1-CPNE3真核表达载体，分别转染人293T和H1299细胞，激光扫描共焦显微镜、免疫印迹法检测细胞样品，免疫组织化学检测肺腺癌临床样品，结果表明，Copine-3蛋白定位于细胞质和细胞核。我们的实验为进一步研究该蛋白在肿瘤细胞内的功能，及其胞内定位与细胞学功能之间的关系奠定了基础。