2.2 单因素优化BPO检测体系

2.2.1 检测波长对检测体系的影响

2.2.1.1 最佳波长的确定

选择不同浓度的BPO标准溶液，分别在波长480、490、500、510、520、530和540nm下采用1cm的比色皿测定其吸光度，如图2。

根据吸光度的大小确定最适检测波长，其中吸光度越大说明检测体系在相应波长下响应性能最好，由图2所示，该体系在510nm处BPO的吸光度最高，说明在检测波长为510nm条件下，检测体系的灵敏度最高，响应性能最好，故筛选最适检测波长为510nm。

2.2.1.2 方差分析

将在各个波长下所测的吸光度的数值进行单因素方差分析，结果见表1。如表1所示，P=0.0001，P＜0.01，所以检测波长对BPO检测体系具有非常显著的影响。

2.2.2 缓冲液pH对检测体系的影响

2.2.2.1 最佳pH的确定

由于BPO只能在酸性条件氧化Fe²⁺为Fe³⁺，发生褪色反应，因此设定pH范围在3～6之间。在优化后得到的最适波长条件下，分别设定缓冲液pH为3.5、3.8、4.1、4.4、5.1、5.4和6.0时采用1cm的比色皿测定BPO标准溶液的吸光度，根据吸光度的大小确定最适缓冲液pH，其中吸光度最大处对应缓冲液的最佳pH条件，如图3。

由图3所示，初期吸光度随着缓冲液pH的升高而逐渐变大，在体系缓冲液的pH为4.4时，吸光度数值达到最高，为0.616。当缓冲液的pH继续升高时，体系的吸光度值又开始出现下降趋势。鉴于本反应为褪色反应，因此选择吸光度较低的数值为最优水平，故筛选最适缓冲液pH为6。

2.2.2.2 方差分析

将在不同缓冲液pH条件下所测的吸光度的数值进行单因素方差分析，结果见2，P=0.0001，P＜0.01，由此得出，缓冲液pH对BPO检测体系的影响非常显著。

2.2.3 反应温度对检测体系的影响

2.2.3.1 最佳反应温度的确定

设定反应温度为室温（约23℃）、30、40、50和60℃，采用1cm的比色皿测定BPO标准溶液的吸光度，根据吸光度的大小确定最适反应温度，如图4。

由图4可知，在反应初期其吸光度出现最大值，随着反应温度的升高，吸光度开始下降，当温度为50℃时，吸光度降至最低点。但伴随温度的提升，吸光度又开始上升，在温度超过60℃时，吸光度又出现下降趋势，这种反复的现象说明，在当反应温度超过为50℃时，检测体系对温度的响应已经出现了不稳定的情况，鉴于此筛选最适反应温度为50℃。

2.2.3.2 方差分析

将在各个波长下所测的吸光度的数值进行单因素方差分析，结果如表3所示。结果表明，P=0.0001，P＜0.01，所以反应温度对BPO检测体系的影响非常显著。

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