咪唑类离子液体提取沙棘叶总黄酮的研究（二）

（4）单因素试验

①离子液体种类对提取率的影响于100mL的两口圆底烧瓶中加入1.00g磨碎的未洗阴干沙棘叶，固液比为1∶20（g·mL^-1），微波功率300W、微波时间6min、微波温度60℃，考察溴化1-乙基-3-甲基咪唑的60％乙醇溶；液、溴化1-丁基-3-甲基咪唑的60％乙醇溶；液、溴化1-己基-3-甲基咪唑的60％乙醇溶；液、溴化1-辛基-3-甲基咪唑的60％乙醇溶；液、溴化1癸基-3-甲基咪唑的60％乙醇溶；液、溴化1-十二烷基-3-甲基咪唑的60％乙。醇溶液对沙棘叶中总黄酮提取率的影响，选择离子液体种类。

②微波时间对提取率的影响称取1.00g未洗阴干沙棘叶粉末置于100mL圆底烧瓶中，乙醇浓度为60％，离子液体溴化1-十二烷基-3-甲基咪唑浓度0.2mol·L^-1，料液比1∶20（g·mL^-1），分别在微波温度60℃，微波功率300W的条件下提取2min、4min、6min、8min、10min，选择最佳微波时间。

③微波功率对提取率的影响称取1.0g阴干沙棘叶粉末置于100mL圆底烧瓶中，乙醇浓度为60％，离子液体溴化1-十二烷基-3-甲基咪唑浓度0.2mol·L^-1，料液比1∶20（g·mL^-1），微波时间4min、微波温度60℃，比较不同微波功率100W、200W、300W、400W、500W对沙棘叶中总黄酮提取率的影响。

④微波温度对提取率的影响称取1.00g未洗阴干沙棘叶粉末置于100mL圆底烧瓶中，乙醇浓度为60％，离子液体溴化1-十二烷基-3-甲基咪唑浓度为0.2mol·L，料液比1∶20（g·mL^-1），微波功率400W、微波时间4min，比较不同微波温度30℃、40℃、50℃、60℃、70℃对沙棘叶中总黄酮提取率的影响。

⑤料液比对提取率的影响称取1.0g未洗阴干沙棘叶粉末置于100mL圆底烧瓶中，乙醇浓度为60％，离子液体溴化1-十二烷基-3-甲基咪唑浓度为0.2mol·L^-1，微波功率400W、微波时间4min、微波温度70℃，比较不同料液比1∶10（g·mL^-1）、1∶15（g·mL^-1）、1∶20（g·mL^-1）、1∶25（g·mL^-1）、1∶30（g·mL^-1）对沙棘叶中总黄酮提取率的影响。

⑥离子液体浓度对提取率的影响

称取1．00g未洗阴干沙棘叶粉末置于100mL圆底烧瓶中，乙醇浓度为60％，微波功率400W、微波时间4min、微波温度70℃，料液比1∶20（g·mL^-1），考察离子液体溴化1-十二烷基-3-甲基咪唑浓度0.2mol·L^-1、0.6mol·L^-1、1.0mol·L^-1、1.4mol·L^-1、2.0mol·L^-1对沙棘叶总黄酮提取率的影响。

（5）正交优化试验确定最佳提取工艺

参考单因素实验的结果设计L₁₈（5³）正交实验表，以微波时间、功率、温度，料液比，离子液体浓度为考察因素，探索沙棘叶总黄酮提取的最佳工艺。

（6）不同前处理方式对沙棘叶总黄酮的影响

于100mL圆底烧瓶中加入1.00g磨碎的未洗阴干沙棘叶，在不同条件下提取总黄酮，冷却后减压抽滤，滤饼用60％乙醇洗涤三次，所得滤液用60％乙醇定容到100mL容量瓶中。量取1mL提取液于25mL容量瓶中，然后加入显色剂，用60％的乙醇定容至刻度。以0mL提取液为参比，测定其吸光度值。三次平行试验后求平均值。在正交试验优化的提取条件下分别比较水洗阴干沙棘叶（6月份采摘）、未洗阴干沙棘叶（6月份采摘）、发酵阴干沙棘叶（6月份采摘）、炒干沙棘叶（6月份采摘）、蒸干沙棘叶（5月份采摘）、自然千晒沙棘叶（5月份采摘）、炒过沙棘叶（5月份采摘）对提取率的影响。

（7）沙棘叶总黄酮抗氧化活性试验

分别量取质量浓度为1.06mg·mL^-1的未洗阴干沙棘叶提取液10μL、20μL、30μL、40μL、50μL、60μL、70μL，置于4mL具塞试管中，再分别加入590μL、580μL、570μL、560μL、550μL、540μL、530μL的lmol·L^-1溴化1-十二烷基-3-甲基咪唑的乙醇溶液，最后与300μL、5.29X10-2mg·mL^-1的DPPH溶液混合，混合液摇匀后于避光环境下静置30min。以OμL的提取液做为参比，在492nm的波长下用酶标仪测定吸光度。DPPH自由基清除率=（A0一A样）／A0×100％，由线性回归方程得出其半数清除率IC50，即沙棘叶中总黄酮对DPPH自由基清除率达到50％时的有效浓度。

参考上述方法测定抗坏血酸溶液对DPPH自由基的清除率。比较沙棘叶总黄酮与抗坏血酸的半数清除率IC50，进而考察沙棘叶总黄酮的抗氧化活性。

二、结果讨论

1、离子液体种类对沙棘叶中总黄酮提取率的影响由图2可知，不同种类离子液体提取率大小顺序为f＞e＞d＞a＞b＞C。离子液体烷基链越长，提取效果越好，一方面与离子液体对植物纤维素的溶解、溶胀有关，另一方面随着离子液体烷基链的增长，其极性变小，有利于沙棘叶总黄酮的溶出，当以溴化1-十二烷基-3-甲基咪唑的乙醇溶液为提取剂时，整个提取剂的极性可能更接近黄酮的极性，沙棘叶总黄酮提取率最高。但离子液体烷基链超过12个碳后，发现离子液体自身水溶性变差，1mol·L^-1Br的60％乙醇溶液配成后有不溶悬浮物，就没做进一步的提取探究。因此，后续均选定离子液体溴化1-十二烷基-3-甲基咪唑进行试验。

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