目的 采用超高效液相色谱-串联质谱技术，建立消毒产品中8类13种抗生素的检测方法。方法 样品经甲醇或乙腈提取后，经Waters HSS T3色谱柱(100 mm×2.1 mm， 1.8μm)分离，三重四级杆串联质谱仪检测。结果 13种选定的抗生素在4～100μg/L范围内线性关系良好，相关系数均大于0.991，检出限为2～25μg/kg。在3种不同剂型的消毒产品中，低、中、高3个浓度加标水平的回收率为71.2%～130.4%，相对标准偏差均小于11.3%，满足消毒产品中抗生素违法添加的检测要求。运用建立的方法，在一份膏霜剂型的消毒产品中检测出氧氟沙星，含量为21.1 mg/kg，其余样品中均未检出相关物质。结论 该方法简单、可靠、重现性好，覆盖的抗生素种类多。

抗生素作为一种杀菌剂，被广泛应用于临床、畜牧业、水产养殖等行业。但由于抗生素的大量使用，其耐药性受到越来越多的关注。众所周知，消毒产品也具有杀灭细菌的作用。不同于欧美等发达国家，我国未将消毒产品纳入处方药进行管理，原卫生部《消毒产品生产企业卫生规范》(2009年版)第五章第三十条明确指出“消毒产品禁止使用抗生素、抗真菌药物、激素等物料”。然而，部分生产企业仍然违规添加抗生素类药物，以增加消毒或抗抑菌效果，用于冒充消毒产品和抗抑菌产品，这不仅加重了抗生素的滥用情况，同时也给消毒和抗抑菌产品的安全使用造成隐患。

目前国内外对抗生素的检测主要包括环境样本、生物样本、肉制品、乳制品、化妆品等，而关于消毒产品中抗生素检测的研究很少，鲜有的报道也只涵盖了一两类抗生素的检测，尚无多类别抗生素检测的报道。原卫生部多次组织专项整治行动，打击违法添加行为，由于没有完善的方法和相应的国家标准，目前仍然无法对相关产品进行有效监管。目前抗生素的检测方法有酶联免疫法、毛细管电泳法、气相色谱-质谱联用法、液相色谱法及液相色谱-质谱联用法等。本方法基于超高效液相色谱-串联质谱(ulta high perfomance chromatography tandem mass spectrometry，UPLC-MS/MS)，建立了对不同剂型的消毒产品中四环素类(四环素、土霉素、金霉素、米诺环素、强力霉素)、大环内酯类(红霉素)、β-内酰胺类(头孢拉定)、磺胺类(磺胺嘧啶)、喹诺酮类(氧氟沙星、诺氟沙星)、林可酰胺类(克林霉素)、硝基咪唑类(甲硝唑)、氯霉素类(氯霉素)8类13种抗生素的检测方法。

1 材料与方法

1.1 仪器和试剂

30 A超高效液相色谱仪(日本岛津公司)，QTRAP 5500三重四级杆串联质谱仪(美国AB SCIEX公司)，Waters HSS T3色谱柱(100 mm×2.1 mm， 1.8 μm，美国Waters公司)。

抗生素标准物质包括四环素、土霉素、金霉素、米诺环素、强力霉素、红霉素、头孢拉定、磺胺嘧啶、氧氟沙星、诺氟沙星、克林霉素、甲硝唑、氯霉素，同位素标记物包括四环素-D6、土霉素-13C22-15N2、米诺环素-D6、强力霉素-D3、磺胺嘧啶-D6、头孢氨苄-D5、左氧氟沙星-D8、诺氟沙星-D5、红霉素13C-D3、克林霉素-D3、甲硝唑-D4、氯霉素-D5，均购自德国Dr. Ehrenstorfer GmbH以及奥地利Romerlabs两家公司。色谱级的甲醇、乙腈购自Merck公司。色谱级的甲酸购自阿拉丁。分析纯的氯化钠购自国药集团。MS级水购自飞世尔公司。0.22 μm尼龙膜购自津滕公司。样品来自于厂家送检样品(非抗生素项目检测样品)，保存在4 ℃冰箱中。

1.2 标准溶液配制

分别准确称取各标准品及同位素内标10 mg，用甲醇溶解并定容于10 mL容量瓶中，配成浓度为约1.0 mg/mL的标准储备液，-20 ℃冷冻避光保存。分别准确吸取适量各单一标准储备液于25 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，配制成浓度为10 μg/mL的混合标准中间液，4 ℃冷藏避光保存；分别吸取适量单一内标储备液于10 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，配制成5 μg/mL的混合内标中间液，4 ℃冷藏避光保存。

1.3 样品前处理

液体剂型：称取0.2 g(精确至1 mg)混合均匀的样品，置于15 mL离心管中，先加入10.0 μL混合内标中间液，再加3.0 mL甲醇，涡旋1 min使样品分散，超声提取10 min，加入0.15 g氯化钠，涡旋混匀，9000 r/min离心5 min，吸取上清液，滤膜过滤，取0.8 mL滤液至进样瓶中，加入0.2 mL水，混合均匀，供超高效液相色谱-串联质谱测定。

凝胶剂型：称取0.2 g(精确至1 mg)混合均匀的样品，置于15 mL离心管中，先加入10.0 μL混合内标中间液，再加3.0 mL乙腈，涡旋1 min使样品分散，超声提取10 min，9000 r/min离心5 min，吸取上清液，滤膜过滤，取0.8 mL滤液至进样瓶中，再加入0.2 mL水，混合均匀，供超高效液相色谱-串联质谱测定。

膏霜剂型：称取0.2 g(精确至1 mg)混合均匀的样品，置于15 mL离心管中，先加入10.0 μL混合内标中间液，再加3.0 mL甲醇，涡旋1 min使样品分散，超声提取10 min，9000 r/min离心5 min，吸取上清液，滤膜过滤，取0.8 mL滤液至进样瓶中，加入0.2 mL水，混合均匀，供超高效液相色谱-串联质谱测定。

1.4 仪器条件

1.4.1 色谱条件

色谱柱：Waters HSS T3色谱柱(100 mm×2.1 mm，1.8 μm)；流动相：A相为0.1%甲酸水溶液，B相为乙腈；流速0.3 mL/min；柱温40 ℃；进样体积5 μL；梯度洗脱程序见表1。

1.4.2 质谱条件

电离方式：ESI+和ESI-同时扫描；离子源温度：550 ℃；毛细管电压： 5.5 kV(ESI+)和 -4.5 kV(ESI-)；气帘气：30 psi；雾化气：65 psi；辅助气：65 psi；监测模式：多反应监测(MRM)模式，各目标化合物的质谱参数见表2。

1.5 校正曲线绘制

在上述色谱条件和质谱条件下绘制校正曲线，该曲线的纵坐标为被测组分i定量离子峰面积Ai与内标物定量离子峰面积Ais之比Ai/Ais，横坐标为样品中被测组分i的含量Ci。

1.6 方法检出限和定量限的确定

选取不含目标化合物的样品，加入低浓度的混合标准中间液，按照1.3节处理后上机检测，获得各目标分析物的信噪比数据，根据加标量，按照3倍信噪比(S/N=3)作为检出限、10倍信噪比(S/N=10)作为定量限的原则计算方法检出限和定量限。

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