一、分析意义

磷是植物营养的三要素之一。因此测定植物全磷是植物营养研究中心的常规分析项目。在了解植物生育期间磷营养的需求规律、吸收和分布状况，诊断作物磷营养水平和制订磷素丰缺指标，施用磷肥效应以及磷与其他营养元素的关系时，都要测定植物全株或某些对磷反应敏感的组织部位中磷(P)的含量。而且磷也是农产品组成分中重要的灰分元素。

植物的全磷(P)含量一般为0.05%～0.5%干物重。植株全磷(P)含量与作物磷素营养有正相关，一般认为植株磷(P) ＜0.15%～0.2%为缺乏，0.2%～0.5%正常。但因作物种类、品种、生育阶段、测定部位不同而有差异，如水稻(分萦期叶片) ＜0.15%为缺乏，0.15%～0.3%为正常;棉花(苗期功能叶柄) ＜0.13为缺乏，0.14%～0.8%为正常。玉米(抽雄期，穗轴下第一叶片) ＜0.1%为严重缺乏，0.15%～0.24%轻度缺乏，0.25%～0.4%正常。因而，也可以测定作物某一部位磷的含量，作为诊断磷素丰缺的指标。当植物体内含磷皿过高时，会使体内N/P和K/P比失调；也会影响对铁、锰和锌的吸收，诱发这些元素的缺乏症状，对植物生长和品质产生不良影响。

二、方法选择的依据

植物样品经H₂SO₄-H₂O₂消煮，待测液中磷通常都选用钥锑抗比色法(翎蓝法)或钒钼黄比色法。前法的优点是灵敏度高，简便、快速、准确。钼黄法的灵敏度虽比钼蓝法较低，但由于其显色浓度范围及允许酸度范围都较宽，对于含磷量较高(0.%P以上)的植物和肥料等样品宜选用此法。含磷量低时以选用钼锑抗法更为合适。

三、钒钼黄比色法

1、方法原理

植物样品经H₂SO₄-H₂O₂消煮分解，植物中的氮、磷是以有机态为主，钾则以离子态存在。用浓H₂SO₄-H₂O₂氧化剂消煮植物样品时，其中的有机物经脱水碳化、氧化分解，变成CO₂和H₂O，使有机氮和磷转化为按盐和磷酸盐，可在同一份消煮液中分别测定全氮、磷、钾(见磷、钾测定)，而且该消煮液对于蒸馏、扩散和比色等定氮方法均适用。

消煮液中的铵盐在碱化后成为NH₃，经扩散(或蒸馏)，用H₃BO₃溶液吸收，直接用酸溶液滴定，以甲基红一溴甲酚绿混合指示剂指示滴定终点，即由蓝变紫红色。由此计算含氮量。标准待测液中的正磷酸与偏帆酸和铝酸在酸性条件下能生成黄色的三元杂多酸(钒铝磷酸)，其组成有人认为可能是P₂O₂ · V₂O5 · 22MoO₃ · nH₂O,溶液黄色的深度与磷含量成正比，可用比色法定量磷。

此法的优点是显色快，黄色很稳定，在24 h内无显著变化;要求显色酸度范围很宽，极限是0.04mol·L^-1～1.6mol·L^-1,最好是0.5mol·L^-1 ～1.0mol·L^-1，在HNO₃、HCl、 HClO₄、H₂SO₄等介质中都可适用;干扰离子少，特别是Fe³⁺和Si的允许存在量远高于翎蓝法;操作简便快速，准确度和重复性较高，相对误差为1%～3%；适测范围广，约为1mg·L^-1～20mg·L^-1～P，吸收波长选择:

比色时选用的波长（nm） 400 440 470 490

浓度范围（mg·L^-1p）0.25～5.5 2.0～15 4.0～17 7.0～20

2、试剂

（1）钒钼酸铵溶液:

A液,25g钼酸铵[(NH₄)₆Mo₇O₂₄·4H₂O，分析纯]溶于400mL水中。

B液，1.25g偏钒酸铵(NH₄VO₃，分析纯)溶于300mL沸水中，冷却后加入250mL浓硝酸(HNO₃，p≈1.42g ·mL^-1，分析纯)，再冷至室温。将A液缓慢地倾入B液中，不断搅匀，用水稀释至1L,贮于棕色瓶中，此溶液酸的浓度为c(HNO₃)=4 mol · L^-1；

（2）氢氧化钠溶液[c(NaOH)=6mol·L^-1]:24g氢氧化钠(NaOH，分析纯)溶于水，稀释至100mL；

(3)2,6-二硝基酚［或2,4-二硝基酚)指示剂；

(4)磷(P)标准溶液[p(P)=50mg·L^-1]；

3、操作步骤

（1）钒钼黄比色：吸取待测液10.00 mL(含P0.05mg～1.0mg),放入50 mL容量瓶中，加2滴二硝基酚指示剂，用氢氧化钠溶液[c(NaOH)=6mol·L^-1 ]中和至刚呈微黄色，准确加入10.00mL钒钼酸铁溶液，用水定容。同时做空白试验。15min后，在分光光度计上波长450nm处和1cm光径的比色杯进行比色测定，以空白溶液调节吸收值的零点。

（2）工作曲线绘制：准确吸取0mL、1.0mL、2.5mL、5.0mL、7.5mL、10mL、15mLP标准液分别放入50mL容量瓶中，按上述操作步骤2显色，测定吸收值后绘制工作曲线。各瓶标准液的浓度为0mg·L^-1、1.0mg·L^-1、2.5mg·L^-1、5.0mg·L^-1、7.5mg·L^-1、10mg·L^-1、15 mg·L^-1P。

5、结果计算

式中: ω(P)——植物中全磷的质量分数，%；

P——测得显色液中磷的质量浓度，mg·L^-1；

V——显色液体积，mL；

m ——烘干样品质量，g；

ts——分取倍数。

参考资料：土壤农业化学分析方法