4、操作步骤

（1）干灰化 称取供干磨碎(0.5 mm)的植物样品0.5000g置于石英坩埚或瓷坩埚中[种子样品应加少量Ca(OH)₂饱和溶液以防B逸失〕，在电炉上低温炭化(至不冒烟)，再移入高温电炉中缓缓升温至500⁰C灼烧2h～3h。冷却后用10mL～20mL盐酸溶液(试剂1)溶解灰分并定容25mL,摇匀，静置澄清(或过滤、离心)。

（2）姜黄素显色吸取1.00mL清液(含B小于1μg )，放入瓷蒸发皿中，加入4mL姜黄素溶液，在55⁰C±3⁰C水浴上蒸发至干，并且继续在水浴上烘干15min(除去残存的水分)，在蒸发与烘干的过程中显红色。加20.00mL酒精[ω(C₂H₅OH)=95%〕溶解，用干滤纸过滤，用1cm比色杯，在550nm波长处比色，以酒精调节比色计的零点。

（3）工作曲线绘制 分别吸取0.2mg·L^-1、0.4mg·L^-1、0.6mg·L^-1、0.8 mg·L^-1、1. 0 mg·L^-1硼(B)标准系列溶液各1mL，放入瓷蒸发皿中，加4 mL姜黄素溶液，以B标准系列的浓度对吸收值绘制工作曲线。

5、结果计算

式中: ω(B)——植物中全硼(B)的质量分数，mg·kg^-1；

P——测得显色液中硼(B)的浓度，mg·L^-1；

ts——分取倍数，灰化液总体积/吸取清液休积=25/1；

m——烘干样品质量，g。

6、注意事项

（1）配制试剂须用石英蒸馏器重蒸馏过的水或用去离子水。

(2)高温电炉的炉壁应洁净，使用高型的坩埚并且要加盖，灰化温度不宜超过500⁰C，灰化时间不应过长。以防样品的污染和挥损。

(3)显色测定过程中，不宜中途停止；显色后不应将蒸发皿长时间暴露在空气中，以免玫瑰花青苷因吸收空气中的水分而发生水解，影响测定结果。

四、甲亚胺比色法

1、方法原理

植物样品用干灰化法分解，稀HCI溶解灰分，溶液中的Fe,Ca,Mg,Si等加饱和BaCO₃溶液分离除去。滤液中硼用甲亚胺比色法测定。用H₃PO₄-HF-HNO₃-HCIO₄消煮土壤，其中磷酸可与硼离子形成配合离子，同时磷酸沸点高，加热蒸发过程不易蒸干，可避免硼的挥发损失。成待测液可直接用ICP-AES法测定B，也可同时测定Fe,AI,Mn,Ti,Ca,Mg,Cu等。

2、仪器及设备

铂坩埚；高温电炉；分光光度计。

3、试剂

①无水碳酸钠(N₂CO₃分析纯)；

②硫酸溶液[c(二分之一H₂SO₄)=4mol·L^-1〕:将110mL浓H₂SO₄(分析纯)缓慢注入蒸馏水中，稀释至1L；

③乙醇[ω(CH₃CH₂OH)=95 %](分析纯)；

④盐酸溶液[c(HCl)= 0.1mol·L^-1]:将8.3mL浓HCI(分析纯)缓慢注入蒸馏水中，稀释至1L。

4、操作步骤

（1）将0.5g通过0.149mm尼龙筛的风干土壤与3g无水碳酸钠在铂坩埚中搅拌均匀，于高温电炉中920⁰C熔融30min。冷却后将熔块放在250mL的烧杯中，加50mL水，用表面皿加盖，加硫酸溶液(试剂②)溶解熔融物(约需15mL左右),pH值应为6.0～6.8(以溴甲酚兰作外用指示剂)。移入500mL容量瓶中。用水洗坩埚及烧杯多次，将洗涤用水并入溶液中。全部溶液体积不超过150mL。加95%乙醇到总体积近500mL时为止，充分混合。加入碳酸钠使之呈碱性反应。稍加摇动使CO₂气泡逸出。用95%乙醇定容。此时过量的碳酸钠以及铁、铝和碱土金属发生沉淀。离心分离，或以干滤纸过滤。

（2）将400毫升清液移入600mL烧杯中(加100mL水防止发生沉淀)，蒸发至小体积。移入铂蒸发皿继续蒸发(为防碱溶液浸蚀玻璃)。蒸干后，小心的灼烧破坏有机质。冷却后，加5mL(或更多)盐酸溶液[c(HC1)=0.1 mol·L^-1]溶解残渣。吸取1mL溶液(含硼量以0.2μg～8 μg为宜)进行比色。

（3）工作曲线绘制：分别吸取0.2mg·L^-1、0.4mg·L^-1、0.6mg·L^-1、0.8mg·L^-1、1.0mg·L^-1B标准溶液各1mL放入瓷蒸发皿中，加4mL姜黄素溶液，按上述步骤显色和比色。B标准系列的浓度为0.01mg·L^-1、0.02mg·L^-1、0.03mg·L^-1、0.04mg·L^-1、0.05 mg·L^-1。

5、结果计算

6、注意事项

(1)试液中Fe,A1,Si等会影响甲亚胺与B的显色，用BaCO₃中和，使Fe, Al等呈氢氧化物沉淀，硅酸与钡形成沉淀而除去。

(2)甲亚胶试剂易为光分解，宜在暗处保存，加显色剂后可将溶液放在恒温箱中((23℃)，显色达稳定需2h。

参考资料：土壤农业化学分析方法