低聚半乳糖(Galact0losaccharide，GOS)是一类在乳糖的半乳糖基一侧连接一个或多个半乳糖分子的的结合寡糖n，属于功能性低聚糖，分子式~PGal一(Ga1)n—Glc／Gal(n为0-6)。目前，酶法合成低聚半乳糖是一种相对简便，经济环保的方法，即利用β一半乳糖苷酶(乳糖酶)以乳糖为底物催化合成低聚半乳糖。

β一半乳糖苷酶来源较为广泛，目前国内外研究较多的β一半乳糖苷酶主要来源于黑曲霉、米曲霉等，而来源不同的β一半乳糖苷酶，其酶学性质也差异很大。本文所采用的B一半乳糖苷酶来源于乳酸克鲁维酵母。T．M．M．Coenen对于此来源的乳糖酶的安全性做了全面的评价。张明丽等对该来源的乳糖酶酶学性质进行了探讨。本文主要对该来源的β一半乳糖苷酶水解乳糖催化生成低聚半乳糖，应用薄层层析定性，HPLC—ELSD定量手段对低聚半乳糖进行分析，并对反应条件进行单因素优化，主要从反应时间、pH、温度、底物浓度、加酶量方面研究。

1材料与仪器

β一半乳糖苷酶(来源为乳酸克鲁维酵母，酶活力经测定为1935U／mL)：荷兰帝斯曼公司；乳糖：国药集团化学试剂有限公司；乙腈(色谱纯)：美国Spectaum公司；其他试剂均为分析纯。Tu一1900型紫外一可见全波长分光光度计：北京普析通用仪器有限公司；JASCOPU一2080高效液相色谱、JASCON2000蒸发光检测器：日本JASCO实验仪器公司。

2实验方法

2．1β一半乳糖苷酶酶活的测定

酶活测定采用ONPG法，根据黎丽f5酶活测定方法操作。即1mL酶液在37℃条件下水浴5min，加入同样在37℃预热5min的ONPG溶液5mL，二者混合后样品在37℃下水浴10min，然后立即加入2mL碳酸钠溶液来终止反应。样品利用紫外分光光度计于420nmN定其吸光值。酶活力单位定义：在37℃，pH为6．0的条件下，以每分钟水解邻硝基苯β—D一半乳吡喃糖苷(ONPG)生成1mmol~基苯酚(ONP)的酶量定义为14'-酶活单位u。

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