炎症性肠病（inflammatoryboweldisease,IBD)是一类累及肠道的慢性非特异性炎症疾病，包括克罗恩病和溃疡性结肠炎。近年来，随着对肠道菌群研究的深入，由肠道菌群紊乱及肠道菌群代谢产物变化引起的免疫紊乱越来越被研究者重视。通过纠正肠道菌群及其代谢产物紊乱、恢复肠黏膜免疫平衡被认为是治疗IBD的一个新的方法叭短链脂肪酸(shortchainfattyacids,SCFA)是肠道内厌氧菌发酵膳食纤维产生的一种代谢产物，主要包括乙酸、丙酸、丁酸，在肠道稳态的维持中起着重要作用。SCFA不仅可以为结肠上皮细胞提供能量还可以维持肠腔中水电解质平衡。

近年来，SCFA与肠道微生态之间的关系日益受到研究者重视。SCFA中的丁酸能够促进肠道离子吸收,改善肠道紧密连接功能，对维持肠道黏膜稳态具有重要意义。此外，Joseph等14研究发现丁酸还具有抗炎作用，但是其详细机制尚不明确。

最近研究发现，作为抵御病原体入侵最关键的成分之一的抗菌肽(cathelicidinrelatedantimicrobialpeptide,CRAMP)与SCFA关系十分密切。熊海涛等研究发现丁酸盐可以上调CRAMP的表达，增强巨噬细胞抑菌杀菌活性，从而缓解黏附侵袭性大肠杆菌感染引起的仔猪临床症状。但是丁酸盐是否可以调节CRAMP缓解IBD的临床症状还需要进一步研究。因此，本实验拟通过丁酸盐干预DSS诱导的小鼠溃疡性结肠炎模型，观察各组小鼠肠道表达的细胞因子及CRAMP变化情况，研究丁酸盐缓解肠炎的免疫学机制，为临床上IBD的治疗提供新的理论依据。

1材料与方法

1.1试剂与动物

DSS购于美国Biosharp公司，Sodiumbutyrate购于Sigma公司，RT-PCR试剂盒购于TaKaRa公司，CRAMP抗体购于武汉三鹰公司^抓-a、IL-lp、IL-6、IL-10试剂盒购于Invitrogen公司。6~8周C57BL/6雄性小鼠购自陆军军医大学新桥医院实验动物中心。

1.2实验动物模型的建立和分组

将6~8周（20~25g)雄性C57BL/6健康小鼠随机分为4组，每组5只：对照组(饮用水）、对照组+butyrate组(2%丁酸盐处理21d)、DSS组(3%DSS处理7d)和DSS+butyrate组(3%DSS处理7d再给予2%丁酸盐处理21d),其余伺养条件完全相同。

1.3小鼠体质量重测定和疾病活动指数计算

建模期间，每天定时称量小鼠体质量，观察小鼠有无腹泻，血便和大便性状，然后按照表1计算疾病活动指数。疾病活动程度指数DA1=(体质量减轻率分数+粪便性状分数+隐血程度分数)/3。

1.4结肠的组织学评分

结肠黏膜结构正常积分为0;中度黏膜炎症反应但无糜烂和溃疡积分为1;黏膜炎症反应伴有糜烂积分为2;黏膜炎症伴有小于1.0mm溃瘍积分为3;伴有1.0~3.0mm溃疡积分为4;伴有大于3.0mm溃疡积分为5。

1.5小鼠结肠病理组织切片染色

(HE)构建小鼠结肠炎模型成果后，每组小鼠在距回盲部约2cm处取大小约2cm结肠组织，清洗干净后置于4%多聚甲醛中固定1周，用乙醇脱水，石蜡包埋。处理样本切成5|xm厚，进行苏木精-伊红(HE)染色，光学显微镜下观察结果。

1.6小鼠结肠免疫组化染色

石蜡组织包埋以后，处理样本切成5pm厚，置于0.01mol/L的枸橼酸钠缓冲液中高压修复，PBS洗3次，3%H202室温孵育5~10min,5%BSA常温封闭1h，CRAMP抗体孵育4T：过夜。次日PBS洗3次,滴加博士德生物素化羊抗兔IgG，室温孵育10min，PBS洗3次,DAB显色，复染，脱水透，封片，光学显微镜下观察结果。

1.7RNA提取和qPCR检测

取一小段结肠组织，清洗干净后，使用Trizol试剂（Invitrogen,Carlsbad,CA，USA)按照步骤从组织中提取总mRNA，用RT-PCR试剂盒(TaKaRaBioInc,Japan)逆转录成互补DNA(cDNA)。使用GoTaqqPCRMasterMix(Promega，USA)和Rotor-GeneqPCRdetectionsystem(Qiagen，Germany)检测相应基因的表达。相应的引物序列见表2。