不同产地银柴胡黄酮含量及其抗氧化活性研究（一）

发布时间：2021-08-26 22:01 编辑者：特邀作者周世红

1 前言

银柴胡是我国常用中药材，为石竹科植物银柴胡的干燥根，别名银胡、山菜根、土参等，主要分布于宁夏、内蒙古等地。银柴胡微寒味甘，临床常应用于治疗小儿疳积发热、久病发热、阴虚潮热、感冒高热等疾病，《证治准绳》清骨散中提到银柴胡和其他中药可治骨蒸劳热，《本草汇言》中说银柴胡治男妇虚劳发热，或咳或不咳。银柴胡富含甾醇类、黄酮类、挥发性物质、生物碱类和酚酸类等活性物质，具有抗炎、抗癌、扩张血管等作用。黄酮类物质有较强的抗氧化作用，具有抗衰老、抗癌，降低胆固醇，降血糖及抗炎等多种功效。目前，已有文献报道银柴胡具有多种黄酮类化合物，但对不同产地银柴胡提取物中的黄酮含量及其抗氧化性研究尚未见到，本研究通过比较不同产地中黄酮的含量及其抗氧化性，为银柴胡的进一步的应用及研究提供参考。

2 实验材料与试剂

2.1 实验材料

中药材银柴胡，分别购于宁夏回族自治区固原市隆德县种植户，陕西省榆林市种植户，内蒙古自治区巴彦淖尔市五原县种植户。

2.2 实验试剂

芦丁对照品（成都德斯特生物技术有限公司，含量98%）；AB-8大孔树脂；乙醇、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠均为分析纯（国药集团化学试剂有限公司）；纯化水；滤纸（抚顺市民政滤纸厂）；容量瓶、锥形瓶。

2.3 实验仪器

酶标仪（SynergyH1，美国Biotek）；电子分析天平（AEG-220型，日本岛津有限公司）；旋转蒸发仪（RE-2000型，上海亚荣生化仪器厂）；高速离心机（ThermoSorvallLYNX4000高速落地离心机，美国Thermo）；Dragonlab移液枪（北京大龙兴创实验仪器有限公司）；恒温水浴锅（HH，金坛市金成国胜试验仪器厂）。

3 实验方法

3.1 银柴胡提取物的制备

取银柴胡药材粉碎，过40目筛，取100g粉末加入8倍60%乙醇加热回流3h，过滤得一次滤液，滤渣加入6倍60%乙醇加热回流2h，过滤得二次滤液，合并两次滤液，于25℃下6000r/min离心15min，取上清液加纯水至100g；提取液用AB-8大孔树脂吸附，80%乙醇洗脱，洗脱液低温真空浓缩至5g，得到银柴胡提取物，于4℃冰箱保存。

3.2 黄酮含量测定

采用紫外分光光度法。

3.2.1 对照品芦丁标准溶液的制备

精密称取10mg芦丁，置于50mL容量瓶中，加60%乙醇至刻度，摇匀，制得0.20mg/mL的溶液。

3.2.2 供试品溶液的制备

称取银柴胡提取液1mL置于50mL容量瓶中，加60%乙醇至刻度，摇匀，再称取上述溶液1mL置于10mL容量瓶中，加60%乙醇至刻度，摇匀，得供试品溶液。

3.2.3 标准曲线制作

分别吸取上述芦丁标准液0.1，0.2，0.4，0.6，0.8mL于10mL容量瓶中，分别加入5%亚硝酸钠溶液0.3mL，摇匀，静置5min，加0.3mL的10%的硝酸铝溶液，放置5min，再加1mol/LNaOH2mL，并用60%乙醇水溶液定容至刻度，摇匀，静置6min，以60%乙醇溶液作为空白对照，于360nm处分别测定其吸光度（A）值。

A值为横坐标，质量浓度为纵坐标，绘制标准曲线。

3.2.4 样品总黄酮含量测定

吸取1mL供试样品溶液，分别置10mL棕色量瓶中，按照“加入5%亚硝酸钠溶液0.3mL”及之后的步骤加入试剂，于360nm处分别测定其吸光度（A）值。精密称取样品1mL，分别置10mL棕色量瓶中，加入60%乙醇至刻度，摇匀，得到对照组溶液，于360nm处分别测定其吸光度（A）值，根据芦丁浓度和吸光度值得到标准曲线方程。

标准曲线回归方程y=0.0445x-0.0057，

R²=0.9996，在0.002～0.016mg/mL范围内线性关系良好，根据方程，可以计算银柴胡总黄酮含量。

3.3 抗氧化能力测定

3.3.1 ABTS自由基清除能力测定

a.试剂配制

ABTS溶液：称取0.0192gABTS（2，2′-联氨-双（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）二胺盐），加入5mL去离子水溶解混匀得到ABTS溶液。

过硫酸钾溶液：称取0.1892g过硫酸钾，加入5.00mL去离子水溶解，混匀。将5mL的ABTS溶液和88µL过硫酸钾溶液混合，在室温避光的条件下静置12～16h形成ABTS自由基储备液。使用前取1000µLABTS自由基储备液，加24mL乙醇水溶液，稀释25倍。

b.实验步骤

向A组试管依次加入500µL待测液，将500µL乙醇水溶液加入B组试管，加完试剂及时盖帽，涡旋混匀。将500µLABTS自由基储备溶液依次加入A试管和B试管中，加完试剂及时盖帽，涡旋混匀，反应10min后在734nm检测A组吸光值和B组吸光值。向C组试管依次加入500µL待测液和500µL乙醇水溶液涡旋混匀，734nm处测吸光值，阳性对照为抗坏血酸。