高效液相色谱-三重四极杆复合离子阱质谱法快速检测保健食品中30种缓解疲劳改善睡眠类违禁添加药物（一）

随着现代人们生活水平的不断提高，健康意识也越来越强，但过快的生活节奏和较大的工作压力，易使身体长期处于精力不够、失眠多梦的亚健康状态。因此，具有相应调理作用、食用方便、副作用小、可长期服用的保健食品，受到消费者的青睐。其中，缓解疲劳类和改善睡眠类的保健食品较为畅销，品种也较多。

然而，保健品行业过快、过热发展，使市场出现不法商家为牟利在保健品食品中违禁添加大量、多种非法化学药物成分的不法现象。由于产品标签中没有标明添加的药物成分及剂量，消费者在不知情的情况下摄入，易引起不良反应，对健康造成严重危害，进而影响保健食品行业良性发展。

目前，保健食品中添加违禁药物的检测方法较多，包括：分光光度法、薄层色谱法、高效液相色谱法、色谱-质潜法等。由于保健食品的基质较为复杂，这些检测方法存在检测组分单一、分离效果差、定性准确度不够、难以鉴别结构相似物、检测耗时较长等问题，无法满足高通量检测的需要。

而国家药品监督管理局的药品检验补充方法和检验项目批准件巾缓解疲劳类和改善睡眠类保健品的检测方法，能同时检测的药物种类较少，灵敏度低，定性定量繁琐。因此，现行标准已无法有效地支撑目前市场监管的要求，亟需一种针对性强、准确高效、适用范围广的检测方法。

三重四极杆复合离子阱质谱（QTRAP）具有质量范围宽、扫描速度快、灵敏度高的优点。与传统的三重四级杆串联质谱（MS/MS）相比，在具有相同定量准确性的同时，定性灵敏度要高出500倍，能提供目标物质的精确分子量以及它的多级质谱碎片离子信息，形成信息库，将质最数十分接近的离子进行有效分辨，还可以破解化合物结构的信息，有着强大定性能力。

通过单次分析可对成百上下种痕量组分进行定性、定量和确证。本实验针对30种保健品中缓解疲劳类和改善睡眠类违禁添加药物，建立了高效液相色谱-三重吗极杆复合离子阱质谱（HPLC-QTRAP）法快速检测法。本方法通量大、操作简便、灵敏度高、准确性强，旨在提高违禁添加药物的检验效率和定性准确度，为新形势下的保健食品临管提供有效的技术支持。

1材料与方法

1.1材料与仪器

50批次缓解疲劳类和改善睡眠类保健品均来源于为市场监督抽检任务，抽检范同为南京市流通领域的药店、超市和商场；乙酸铵分析纯98％；甲醇和乙腈色谱纯美国MERCK公司；超纯水；标准品：地西泮（批号171225-201304，纯度99.9％）；硝西泮（批号171217-201403，纯度99.9％）；氯硝西泮（批号171227-201404，纯度99.7％）；氯氮卓（批号171248-200702，纯度99.4％）；奥沙西泮（批号171229-200603，纯度99.6％）；马来酸咪哒唑仑（批号171250-20040l，纯度99.5％）；劳拉西泮（批号171253-201102，纯度99.8％）；艾司哗仑（批号171219—201604，纯度99.9％）；阿普唑仑（批号171218-201305，纯度99.5％）；巴比妥（批号171220-200602，纯度99.5％）；苯巴比妥（批号171222-201206，纯度99.7％）；异戊巴比妥（批号171221-201203，纯度99.9％）：司可巴比妥钠（批号171223-200402，纯度99.4％）；氯美扎酮（批号100408-200401，纯度99.6％）；佐匹克隆（批号100870-200801，纯度99.5％）；马来酸氯苯那敏（批号100047-201507，纯度99.7％）；青藤碱（批号110774-201808，纯度94.6％）；盐酸文拉法辛（批号100543-201602，纯度99.9％）；烟酸（批号100434-201603，纯度99.8％）；那红地那非（批号520039-201401，纯度98.3％）；红地那非（批号520047-201401，纯度99.9％）；伐地那非（批号520041-201401，纯度99.0％）；西地那非（批号510068-201401，纯度99.9％）；豪莫西地那非（批号520046-20140l，纯度99.6％）；氨基他达拉非（批号520042-201401，纯度99.4％）；硫代艾地那非（批号520048-201401，纯度99.5％）；伪伐地那非（批号520041-201401，纯度99.0％）；那莫西地那非（批号520040-20140l，纯度99.5％）；以上标准品均购自中国食品药品检定研究院；羟基豪莫西地那非批号CDDM-H942840，纯度98.8％，TRC；他达拉非批号CDFZ-T-103，纯度99.6％。

1260型高效液相色谱仪：美国Agilent公司；4500型三重四极杆复合离子阱质谱（QTRAP）仪：美国SCIEX公司；XS205DU型电子分析天平：梅特勒-托利多仪器；SB-5200DT型超声波清洗机：宁波新芝生物科技股份有限公司；Milli-Q型超纯水系统：美国Millipore公司。

1.2实验方法

1.2.1溶液制备

1.2.1.1标准品溶液配制

单个标准品储备液的配制：将30种违禁添加药物分别称取约10mg，置于10mL容量瓶中，11种那非类标准品中加入一定量的乙腈超声溶解后定容，其余标准品加入一定量甲醇超声溶解后定容，均配制成浓度约为1mg/mL的标准品储备液，并保存于-4℃冰箱中。
混合标准品溶液的配制：分别精确吸取30种标准品储备液适黄于一个100mL容量瓶中，用甲醇稀释混匀后定容。使浓度为1～10μg/mL的混合标准品溶液，待使用时进一步稀释。

1.2.1.2供试品溶液的制备

将片剂、颗粒剂和胶囊（内容物）样品细致研磨，得到均质样品后称量，称取0.1000g左右样品于100mL容量瓶中，加入甲醇适量，超声提取30min，冷却至室温，用甲醇定容至刻度，摇匀，静置，取上清液经0.22μm有机滤膜过滤，取滤液待测。若阳性样品浓度超出线性范围则用甲醇按一定比例稀释后再测。

1.2.2高效液相色谱条件

色谱柱：PhenomenexKjneLex-C₁₈色谱柱，规格50mm×2.1mm，2.6μm；柱温：40℃；流动相：A为乙腈，B为10mmol/L乙酸铵水溶液；梯度洗脱：0～7min，10％A～90％A，7～8min，90％A，8～8.1min，90％A～10％A，8.1～10min，10％A；流速：250μL/min；进样量：1μL。

1.2.3三重四极杆质谱参数

离子源：TurboV电喷雾离子源（ESI）；扫描模式：正、负离子同时扫描，定时多反应监测→信息依赖性获取→增强型子离子扫描（ScheduledMRM→TDA→EP）；扫描范围：50～650Da；气帘气（CUR）：30psi；碰撞气（CAD）：High；喷雾电压（IS）：5500V/-4500V；离子源温度：550℃；雾化气（GASl）：55psi；辅助气（GAS2）：55psi。经质潜条件优化后，30种物质的色谱保留时问、分子离子对及其采集参数，详见表1。

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