高效液相色谱-串联质谱法测定莱芜香肠中3种β-受体激动剂残留（二）

1.3.2 质谱条件

串联四极杆电喷雾ESI离子源，选择正离子电离模式；喷雾电压3 500 V，雾化室温度350℃，鞘气流量35 m L/min，辅助气流量5 m L/min，毛细管温度350℃。检测条件如表2。

1.4 样品处理

1.4.1 提取

准确称取研磨均匀样品2.0 g置于50 m L离心管中，加入8 m L p H5.2的0.2 mol/L乙酸铵缓冲液，再加入β-葡糖醛酸苷肽酶/芳基磺酸酯酶溶液40μL，涡旋混匀，于37℃电热恒温振荡水槽中水解过夜；取出冷却后，用高氯酸调节p H至1.0，超声振荡20 min，取出置于80℃水浴30 min;10 000 r/min 10℃冷冻离心10 min，收集上清液；残渣用0.1 mol/L高氯酸重复提取1次，10 000 r/min离心10 min，合并上清液；用1 mol/L Na OH溶液调节p H至4.0，准备过小柱净化。

1.4.2 净化

HLB小柱依次用6 m L甲醇、水活化，将提取液以2 m L/min速度过柱，弃去滤液，用2 m L 5%甲醇淋洗；待小柱抽干后，再用6 m L甲醇洗脱，洗脱液用氮气吹至近干；用3 m L0.1 mmol/L高氯酸溶液溶解残渣，供MCX小柱净化用；MCX小柱依次用3 m L 5%甲醇氨、水、0.1 mmol/L高氯酸（p H4.0）溶液活化，将上述净化液过柱；弃去滤液，再依次用1 m L甲醇、2%甲醇水溶液淋洗，抽干后用7 m L 5%甲醇氨洗脱；洗脱液用氮气吹至近干后，用1 m L甲醇-0.1%甲酸水（V:V=1:9）复溶，旋涡混合1 min，过0.2μm滤膜后上机测定。

2 结果与分析

2.1 色谱、质谱条件优化

为使组分获得更好分离效果，本试验对流动相进行了优化选择。依据文献研究结果，本试验通过比较不同流动相组成对信号强度的影响，最终选择以0.1%甲酸水和甲醇为流动相进行梯度洗脱，分离效果好，灵敏度高、重现性好，分离时间短。在正离子模式下，进行母离子全扫描，确定分子离子，并对仪器电离电压、锥孔电压、碰撞能量等参数进行优化。经过优化得到3种β-受体激动剂的全扫描总离子流（TIC）质谱色谱图及MRM色谱图、二级质谱图（图1～2）。

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