β一半乳糖苷酶(EC3．2．1．23)，全称为β—D．半乳糖苷半乳糖水解酶，又名乳糖酶，是一种广泛存在于动植物及微生物中的多功能酶。它不但能够水解乳糖，还具有半乳糖苷转移活性。当以乳糖为底物时，它可以切割乳糖的β-(1，4)糖苷键，并将游离的半乳糖残基以β-(1，3)、β-(1，4)、β-(1，6)糖苷键连接到其他糖分子上，形成非消化性的功能性低聚糖一低聚半乳糖(简称GOS)。由于低聚半乳糖具有优良的特性和特殊的生理功能，目前它已经被广泛应用在保健品、乳品工业、糖果、饮料等领域。根据耐热性能的差异，可以将β-半乳糖苷酶分为常温和高温β-半乳糖苷酶。

目前，这两类酶在低聚半乳糖的工业化生产都有应用。其中，高温β-半乳糖苷酶热稳定性好，可以在高温下进行转苷反应，具有转化率高且反应体系不易染菌等优点，是当前研究的热点。然而，我国在耐热、高转苷活性β-半乳糖苷酶制备和应用方面的研究不多。目前，我国工业生产中所用的乳糖酶主要依赖从日本或者美国进口，价格昂贵，制约了低聚半乳糖的工业化生产。

在前期研究中，本研究室实现了硫矿硫化叶菌β-半乳糖苷酶突变体F441Y在毕赤酵母中的重组表达。并且考察了重组游离酶转化乳糖制备GOS的效果，结果显示GOS最高转化率可以达到61．7％。然而，该重组酶为胞内酶，要获得游离酶就需要进行细胞破碎，不但耗能，且酶活回收率低。为了克服上述缺点，本研究考察了利用全细胞β-半乳糖苷酶转化乳糖生产低聚半乳糖的效果，为低聚半乳糖的全细胞酶催化生产做出了一定的尝试。

1材料与方法

1．1菌株

毕赤酵母KM71／pPIC3．5K—F441Y菌株为本实验室保藏。

1．2主要试剂

试剂：蛋白胨、酵母粉，购自Oxoid公司；邻硝基苯β-D一半乳吡喃糖苷(oNPG)，购于美国的Sigma公司；酵母基础氮源(YNB)，由上海生工生物工程有限公司提供；α-乳糖等国产分析纯试剂，购于国药集团化学试剂有限公司。

1．3培养基

摇瓶培养基YPD、BMGY、BMMY等参考Invitro．gen公司的毕赤酵母表达手册。

1．4培养方法

种子培养：从一80℃保藏的甘油管中取100L菌液，接种于40mLYPD培养基中，在200r／min、30℃条件下振荡培养24h。

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