杂色曲霉素检测

参考资料：食品卫生微生物检验标准手册    

       杂色曲霉素是由杂色曲霉、构巢曲霉等产生的有毒代谢产物。该毒素是致癌物质，主要污染大米、玉米、小麦等谷物和花生、黄豆。杂色曲霉毒的化学结构式如图21—1。 杂色曲霉素为淡黄色结晶，分子式为C18 H12O6，分子量为324。在紫外光灯下具有暗砖红色荧光。杂色曲霉素溶于极性弱的溶剂中，如三氯甲烷或比三氯甲烷极性更弱的溶剂，微溶于很多其他溶剂，不溶于水。由于毒素带酚羟基，羟基在一定的条件下发生水解而影响对光的吸收性能，当用分光光度法测定毒素时必然影响结果，故实验时必须注意酸和溶剂。目前我国还没有制定杂色曲霉素的卫生标准，采用的分析方法主要是薄层色谱法和高效液相色谱法。但高效液相色谱法的回收率和检出限度均不理想，现介绍薄层色谱标准检测方法。

一、适用范围    

     本方法适用于大米、玉米、小麦、黄豆及花生等各种食品中杂色曲霉素的测定。

二、原理    

      样品中的杂色曲霉素经提取、净化、浓缩、薄层展开后，用三氯化铝显色，再经加热产生一种在紫外光下显示黄色荧光的物质，根据其在薄层上显示的荧光最低检出量来测定样品中杂色曲霉素的含量。

三、试剂    

1、三氯甲烷；    

2、正己烷或石油醚(30～600C或60～900C)；    

3、甲醇；    

4、苯；    

5、冰乙酸；    

6、甲酸；    

7、95％乙醇；    

8、4％氯化钠溶液；    

9、20％三氯化铝-乙醇溶液：称取20g三氯化铝(A1C113·6H2O)，溶于100mL乙醇中，过滤，室温保存；    

10、杂色曲霉素标准溶液：用杂色曲霉素标准品配制成每毫升相当于lOμg的苯溶液。用紫外分光光度计标定其浓度(最大吸收峰的波长325nm，分子量324，摩尔消光系数15200)，并作硅胶薄层色谱纯度鉴定，避光，放置于40C冰箱中保存；    

11、杂色曲霉素标准使用液：用苯将10μg／mL的杂色曲霉素标准溶液稀释成每毫升相当于l和0.4μg的杂色曲霉素溶液。避光，放置于4℃冰箱中保存。

四、仪器

1、小型粉碎机；

2、样筛；

3、电动振荡器；

4、全玻璃浓缩器；  

5、玻璃板：l0cm×10cm与10cm×18.5cm两种；    

6、展开槽：内长10cm、宽4.5cm、高17cm与内长11.5cm、宽60cm、高19cm；    

7、喷雾器；    

8、空气泵或油泵；    

9、紫外光灯：波长365nm；    

10、微量注射器。 五、操作步骤