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液相色谱方法探索干货分享(四)

沈磊-会员头像-www.bzwz.com伟业计量
沈磊 2020-11-23 20:45 评论( 0 ) 浏览( 1351 )

如何选择缓冲溶液的PH:

在选择缓冲液PH值之前,应先了解被分析物的Pka,高于或低于Pka两个pH值单位的,有助于获得好的、尖锐的峰,从pH公式:pH=Pka+log([A-]/[A])得知,溶液pH值高于或低于Pka两个单位,化合物中99%以一种形式存在,而一种形式存在的化合物才能获得好的尖锐的峰。

显示的是它的离子形式和中性化合物的转变,苯甲酸的Pka等于4.2,理论上由pH公式得知,当溶液PH值等于2.2时,99%的苯甲酸以中性化合物存在,pH值等于6.2时99%的苯甲酸以离子形式存在,所以当缓冲液pH值等于2.2时,中性化合物以羧酸形式保留于反相柱。

当化合物只有氨基时,缓冲体系的选择十分简单,大多数氨基化合物在pH值小于9时都被质子化,所以所有pH值在7或更低的溶液均适合应用,你也许会问水的pH值大约是7,为什么还用缓冲盐,因为缓冲盐有助于增加方法的可靠性,以及色谱峰的尖锐性,pH值的降低有助于氨基化合物保留的减弱,减小化合物与硅胶表面硅羟基的作用,而使峰更尖锐,任何缓冲液均可应用于氨基化合物的分析,但我们认为pH值等于3的磷酸钾盐最适合用于氨基化合物的分析。

在上面两个例子中,pH=3的磷酸钾盐都能获得良好的应用,在一般情况下,它是含羧基和氨基化合物分析中最好的缓冲液,并且我们认为在氨基化合物分析中钾盐比钠盐更好。

这个根据经验,对方法探索有兴趣的同学可以私下讨论。

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