亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠比色法测定肾上腺酮

采用亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠比色法进行肾上腺酮的定量分析研究。紫外-可见吸收光谱显示，肾上腺酮与显色试剂显色后，溶液在498 nm出现强吸收峰。考察其强度与肾上腺酮浓度间的数学关系，得到498 nm处峰强与肾上腺酮浓度负对数之间的线性方程、线性范围和检测限，从而实现肾上腺酮的定量分析，为该类药物的质量控制等提供一定研究基础。

肾上腺酮的检测方法主要包括高效液相色谱法、电化学法等。有文献报道利用金纳米粒子/聚吡咯复合物修饰的PGE电极进行肾上腺酮的电化学定量分析，实现了药物血清和尿液加标后肾上腺酮的含量测定，检测限为0.09μM。虽然相比于未修饰的PGEs，新型电极将肾上腺酮的氧化电流增大了5倍，但其制备过程也需要较长时间。刘琪等人利用UPLC-MS/MS法定量分析类固醇激素，其中肾上腺酮的定量限为0.530 ng/mL。郭黛苹等人采用反相离子对高效液相色谱法检测肾上腺素与肾上腺酮，其检测限为2.8 mg/L。

比色法因仪器价廉、操作简便、通用性强等特点得到广泛应用。其原理是利用待测物自身颜色或加入显色剂后的颜色深度与待测物浓度间的关系来进行分析。

肾上腺酮作为药物，使用时剂量过高会增加产生副作用的风险，因此有必要建立更加方便快捷、灵敏通用的肾上腺酮分析方法。本文基于亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠比色法，对肾上腺酮定量分析进行系统研究。

1仪器与试剂

1.1仪器

T6新世纪紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限公司)，分析天平(梅特勒托利多)。

1.2试剂

肾上腺酮盐酸盐(西格玛奥德里奇有限公司)，亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠(北京化工厂)。

2方法

2.1肾上腺酮标准溶液配制

10 mg肾上腺酮盐酸盐粉末精密称定，用超纯水溶解、稀释并定容至10 mL量瓶中，制成浓度为1.00 mg/mL的储备溶液，低浓度标准溶液均由储备液逐级稀释而得。

2.2显色过程

1 mL肾上腺酮储备溶液加入至0.5 mL亚硝酸钠溶液(5%)，混匀放置6分钟，再加入0.5 mL硝酸铝溶液(10%)摇匀放置6分钟，最后加入氢氧化钠溶液(5 mol/L)，混匀作用15分钟显色即可。

3结果与讨论

3.1显色后溶液的稳定性考察

将1 mg/mL肾上腺酮标准溶液与显色剂显色，考察显色后1小时内溶液的紫外-可见吸收光谱变化(图1)。从图中可以看出，显色1分钟后特征吸收498 nm即出现，且随着显色时间的不断增加，其峰强缓慢增加，但1小时内其峰强变化不大，相对稳定。综合考虑检测时间和显色完全程度两个因素，最终本实验选择15分钟作为显色时间，既保证显色相对完全，又保证了较短的检测时间。

3.2分析方法的建立

分别将1 mg/mL、0.1 mg/mL、10μg/mL、1μg/mL、等体积水溶液与显色剂显色，显色后溶液经适当稀释，采集紫外-可见吸收光谱，见图2(A)，随着肾上腺酮标准溶液浓度降低，498 nm处的峰强也逐渐降低，进一步根据498 nm处的峰强随肾上腺酮标准溶液的浓度变化关系进行线性拟合，见图2(B)。得到峰强与浓度负对数间的线性方程为y=3.67218-0.72556x,R2=0.99901，线性范围为10μg/mL-1 mg/mL，根据信噪比(S/N)大于3，计算出检测限(limit of detection,LOD)为9.06μg/mL。

3.3分析方法的验证

配制浓度分别为50μg/mL和0.5 mg/mL的肾上腺酮溶液，按照所建立的分析方法测定其498 nm处峰强，每个样品测5次，5个数据取平均值，并计算相对标准偏差(RSD)，来验证方法的重复性。进一步将峰强平均值带入线性方程中，求得其浓度的测定值，由测定值与真实值的比值-回收率验证方法的准确性。结果见表1，由表1可以看出，该方法具有较高测定准确度和精度。

4结论

本文基于亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠比色法对肾上腺酮进行了定量分析，建立了498 nm处峰强度与肾上腺酮浓度负对数间的线性关系，并对其进行验证。结果表明，本文所建立方法可以快速、准确的测定肾上腺酮的含量，为该药物的质量控制和临床用药体内药物监测等提供通用、便捷的检测手段。

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