有关肠癌组织中抗生素检测及胃肠消化模拟

环境中普遍存在的药物残留物，已经成为潜在的环境生态危险源。磺胺类药物是常用的一组人工合成的、具有对氨基苯磺酰胺结构的一类药物总称，具有较强的抑菌性，被广泛应用于家畜细菌传染病的预防和治疗，同时也用来作为生长剂促进动物生长。动物在使用磺胺类药物以后，部分药物将以原型化合物或代谢产物的形式随排泄物进入生态环境，给土壤、水体等带来不良影响，影响人类健康，其不良后果不容忽视。

由于在畜禽养殖及临床医疗上抗生素的大量使用并不断向环境中排放，造成水资源和土壤环境的严重污染，并诱发许多细菌产生耐药性，对人类健康造成威胁。体外胃肠模拟法为研究学者研究人类及动物提供了一种简单、快速、低成本的方法，该方法广泛应于各类物质的研究。

该方法曾用于测试多酚、黄酮类及咖啡黑色素抗氧化性能等。目前国内外对于磺胺类抗生素已有部分研究，主要集中于磺胺类抗生素的检测方法、水土中的迁移转化、抗性基因、污染修复等方面的研究，但对于磺胺类抗生素的胃肠消化模拟实验还未见，而已有报道在儿童尿液中检测出磺胺类抗生素，该胃肠模拟研究可为抗生素在人体内的消化代谢规律及肠癌致病风险提供依据口。

1资料与方法

1．1主要仪器

超声清洗仪、恒温水浴锅、Agilent一1200高效液相装置(Agilent公司，美国)、WFZUV一2100型紫外可见分光光度计(上海博迅仪器有限公司)、电子天平(ALl04，METTLERTOLEDO仪器有限公司)。

1．2主要材料

收集我院结直肠肛门外科大肠癌手术标本共34例，其中男20例，女14例，年龄范围45—79岁，平均年龄65．2岁，体重59—75kg，平均体重65kg。并于距肿瘤大于5．0cm处取材近端肠管正常组织34例作为对照组。

1．3药品与试剂

正己烷、乙腈(色谱纯)；乙酸、无水硫酸钠(分析纯)、ST、SM、SM2、SMX，磺胺药物购自SIGMA公司，纯度均大于99．99；甲醇(色谱纯)，甲酸，胃蛋白酶(EP232—25G)、胰蛋白酶(ET355—25G)等，实验用水为超纯水。

1．4肠部组织样本分析实验

方法：称取预处理样品5g置于离心管中，加入无水硫酸钠20g，乙酸一乙腈(1+99)混合溶剂2Oml，超声提取30min，残渣中加入乙酸一乙腈(1+99)混合溶剂20m1，超声提取10min，上清液一并转入棕色瓶中，40℃水浴中加热破乳去上层油脂，加入正己烷净化，氮吹浓缩n引，取下清液过0．22m滤膜，高效液相仪测试分析。

1．5抗生素胃肠消化实验(表1)

1．5．1胃消化模拟实验方法磺胺类抗生素实验设置一个人体模拟组(完全模拟人体环境)，三个对照组，各组除胃液、肠液成分加入不同外，其余条件均相同。取50Oml棕色瓶(锡箔纸包裹)，加入胃液50ml，及抗生素，磺胺类抗生素初始浓度为0．25mg／mI，通N(避免空气氧化)，于37。C水浴中摇动。在消化时间为0．5、1、1．5、2h时取上层清液经0．22m滤膜过滤后用HPLC测定。磺胺类抗生素实验设置一个样品组，三个对照组，对照组1胃模拟部分与样品组相同，对照组2用蒸馏水代替胃液，对照组3用蒸馏水代替胃液中的HC1(区分酸环境与胃蛋白酶的作用)。