邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯(di-2-ethylhexylphthalate，DEHP)是一种增塑剂，被广泛地应用于食品包装、洗护用品，医疗器材等消费品中，人们可通过食物、水、空气等多种途径接触到DEHP。与此同时，随着塑料制品的使用和废弃，DEHP会逐渐释放进入到环境中。根据美国环保局规定人均DEHP每日暴露最大量是20μg/kg，人均从生活环境、食物和水中摄取的DEHP是每日0.1~5μg/kg。DEHP在动物体内的急性毒性并不高，半数致死量(medianlethaldose，LD50)在大鼠体内的数值为30.6g/kg。

近年来，DEHP被公认为是一类环境内分泌干扰物(endocrinedisruptingchemicals，EDCs)，会对人体造成多种不良影响。以往对DEHP的研究大多是针对雌性大鼠生殖、发育及各脏器造成的损伤等方面。但DEHP对雄性大鼠甲状腺的研究却很少，人们忽略了其对甲状腺不同程度的损害作用，并且这种损害作用在不同年龄段的作用程度可能有所差异。有研究显示，女性患甲状腺癌的几率要高于男性，可能与雌激素水平有关，DEHP作为环境内分泌干扰物具有类雌激素的作用，那么当男性长期暴露在DEHP环境中时，是否也会增加甲状腺疾病的发病率，目前研究尚浅。因此本研究针对成年雄性大鼠在不同剂量DEHP暴露下探究其对甲状腺激素水平所产生的影响，并尝试探究其作用机制，为日后推广于成人长期暴露DEHP所产生影响提供可靠的理论依据，同时为人群甲状腺临床研究提供新思路。

1材料与方法

1.1试剂和仪器

本研究使用DEHP标准品(纯度99.6%)、水合氯醛、氯化钠(优级纯)、硫酸铵(优级纯)、浓硫酸(优级纯)、三氧化二砷(优级纯)、氢氧化钠(优级纯)、硫酸铈铵(优级纯)均购自国药集团化学有限公司。碘酸钾(基准试剂，纯度≥99.995%)购自中国上海Aladdin试剂公司。所用胚芽玉米油购自超市。使用超级恒温水浴振荡器购自南京顺流仪器有限公司，双光束紫外可见分光光度计购自北京普析仪器有限公司，全自动γ计数仪(WallacWizard-2®2470)购自美国PerkinElmer公司，酶标仪(Cytation3MFD)购自美国伯腾仪器有限公司。碘(125I)、T3、T4、FT3、FT4、TSH放射免疫分析试剂盒购自北方生物技术研究所。促甲状腺激素释放激素(TRH)ELISA试剂盒、血清转甲状腺素蛋白(TTR)ELISA试剂盒和血清甲状腺刺激抗体(TSAb)ELISA试剂盒购自上海古朵生物科技有限公司。

1.2动物实验

选购北京维通利华实验动物技术有限公司繁育的健康的SPF级2月龄的雄性成年Wistar大鼠36只，许可证号为SCXK(京)2016-0006。所有动物实验取得哈尔滨医科大学动物与医学伦理委员会(批准号2015010)批准。动物实验室温度控制在20~25℃，湿度控制在45%~75%，光照为16~20lx条件下，每日给予新鲜的蒸馏水和颗粒饲料使其自由进食进水适应性饲养7d。将动物按体质量随机分为4组，每组9只，分别为对照组，低、中、高剂量DEHP暴露组(DEHP含量分别为6%、12%、24%)。动物实验开始后，每天用玉米油配制含DEHP的暴露样品，玉米油的配制参照大鼠的NOAEL，采用灌胃的方式分别对低、中、高剂量组进行DEHP暴露处理，对照组给予玉米油。根据体质量变化随时调整灌胃剂量。每周称取1次大鼠体质量，并观察大鼠的生长发育情况是否发生异常。

1.3样品的收集和准备

饲养3个月后处死之前，将全部大鼠放入代谢笼中，用干净的玻璃管收集大鼠24h尿液，1000r/min离心10min后取上清储存于-80℃冰箱中直至日后检测分析。用水合氯醛麻醉大鼠，通过腹主动脉采集血样，静置直至血样凝固，3000r/min离心15min获得血清，用于分析激素水平。

1.4尿碘水平的测定

尿碘测定方法根据国家碘缺乏病参照实验室提供的《WS/T107-2006尿中碘的砷铈催化分光光度测定方法》原理实施进行。根据国家碘缺乏病参照实验室提供的人尿中碘成分分析标准(GBW09109h)进行参考分析。

1.5放射免疫分析RAI

使用北京北方生物技术研究所生产的放射免疫分析试剂盒，按照使用说明书操作，使用全自动γ计数仪测定血清中T3、T4、FT3、FT4、TSH水平。

1.6酶联免疫吸附测定

使用上海古朵生物技术研究所生产的ELISA试剂盒，测定血清中TRH、TTR、TSAb水平。实验操作过程严格按照试剂盒操作说明书进行，使用酶标仪，以空白孔调零，在450nm波长条件下测定每孔吸光度D(450)值。根据标准曲线计算出标准曲线方程，将测得的样品D(450)值代入方程求得样品的浓度。