抗新型冠状病毒候选药物法维拉韦首批国家对照品的研制（一）

由新型冠状病毒（severe acute respiratory syndrome coronavirus 2, SARS-CoV-2）导致的新型冠状病毒肺炎（corona virus disease 2019, COVID-19）自2019年肆虐全球，给人类带来了重大的生物安全威胁。COVID-19主要通过呼吸道飞沫、密切接触以及气溶胶等途径传播，传染性强、传播速度快、流行范围广，已导致全球210多个国家和地区暴发疫情。如何预防新冠病毒以及治疗感染患者，对全球公共卫生是一个巨大的挑战。

目前全球都在积极开展药物研发，但针对COVID-19的特效药尚未研发成功，“老药新治”是快速控制疫情的一种有益手段，“老药”相比于全新结构药物，其合成工艺成熟、安全性和药代动力学数据已知，和新药相比有一定的优势。法维拉韦（favipiravir，又称法匹拉韦，图1）是一种新型广谱抗RNA病毒药物，新近的体内外研究证实它对SARS-CoV-2有明确的抑制作用。法维拉韦于2014年3月在日本批准上市，由富士胶片集团富山化学工业株式会社开发，作为日本的国家战略储备药物，被纳入《日本新型冠状病毒疾病治疗方案》。2016年6月，浙江海正药业股份有限公司与日本富山化学工业株式会社签订化合物专利独家授权协议，负责含法维拉韦的抗流感病毒药物在中国的研发、制造与销售。2020年2月15日，由海正药业生产的法维拉韦获国家药品监督管理局有条件批准上市，剂型为片剂，商品名为Avigan®，适应证为治疗成人新型或复发流感（仅限于其它抗流感病毒药物治疗无效或效果不佳时使用）。2020年2月在深圳市第三人民医院进行临床试验，比较了法维拉韦（35例）与洛匹那韦/利托那韦（45例）治疗COVID-19的疗效，结果表明法维拉韦的抗病毒疗效优于洛匹那韦/利托那韦，副作用较低，法维拉韦已被纳入《军队支援湖北医疗队新型冠状病毒感染疾病诊疗方案》。2020年在工信部统一调拨下，海正药业生产的法维拉韦片已经驰援全球26个国家或地区，用于协助治疗COVID-19。

目前美、欧、日、中四国药典均未收载法维拉韦，为了有效控制产品质量，满足企业注册上市及生产的需要，亟需制备法维拉韦首批国家化学对照品。本研究对法维拉韦进行了结构确证，然后针对其特性进行了理化性质检查、纯度分析以及稳定性考察，采用质量平衡法赋值，并通过氟核磁共振定量法、进口对照品外标法及差示扫描量热法对定值的结果进行验证，最终建立了法维拉韦首批国家化学对照品。

1 仪器与试药

1.1 仪器

三重四级杆液相质谱仪（Quattro Premier XE QQQ，Waters公司）、核磁共振仪（Bruker Ascend 600，Bruker公司）、5 mm PABBO探头、试验控制及数据处理软件（Topspin4.0，Bruker公司）、傅立叶红外光谱仪（Frontier，PerkinElmer公司）、高效液相色谱仪（e2695-2998，Waters公司）、气相色谱仪（7890B-7697A，Agilent公司）、电子天平（XP205，Mettler公司）、超声仪（KQ-500DB，昆山市超声仪器有限公司）、酸度计（S40K，Mettler公司）、水分测定仪（V30S，Mettler公司）、马弗炉（FP311C，yamato公司）、动态蒸气吸附仪（DVS advantage，SMS公司）、恒温恒湿箱（HPP260，Memmert公司）、差示扫描量热仪（DSC3，Mettler公司）。

1.2 试药

法维拉韦待标品（海正药业），法维拉韦进口对照品（批号3812-027A1，TLC公司），法维拉韦杂质Ⅰ~Ⅴ（海正药业），甲醇（批号191614，Fisher公司，含量为99.9％），氘代二甲基亚砜（批号STBJ0941，Sigma公司），溴化钾（批号20160307，国药集团化学试剂有限公司），乙腈（批号JB091230，Merck公司），磷酸二氢钾（批号20181209，国药集团化学试剂有限公司），磷酸（批号20171026，国药集团化学试剂有限公司），无水碳酸钠（批号20170106，国药集团化学试剂有限公司），N,N-二甲基乙酰胺（批号18210305G901，Oceanpak公司），Composite-5卡氏试剂（批号I1710，Fluka公司），4,4’-二氟二苯甲酮（批号：H7H4B-ND，TCI chemicals公司），去离子水（18.2 MΩ，实验室自制）。

2 方法与结果

2.1 结构确证

2.1.1 质谱

质谱离子源为电喷雾离子源（ESI），正离子模式检测，离子源温度120 ℃，毛细管电压3.5 kV，锥孔电压10 V，锥孔气流量50 L/h，脱溶剂气温度350 ℃，脱溶剂气流量600 L/h，流动相为甲醇-水（50：50），流速0.2 mL/min。待标品的质谱图如图2所示，加氢、加钠的准分子离子峰分别为157.86、179.86，与法维拉韦的理论相对分子质量157.10一致。

2.1.2 核磁共振鉴别

将待标品溶解于氘代二甲基亚砜制成溶液，于600 MHz核磁共振仪中分别测定本品的氢谱和碳谱，见图3。

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