抗新型冠状病毒候选药物法维拉韦首批国家对照品的研制（三）

2.2 质量分析

2.2.1 有关物质

采用高效液相色谱法（HPLC）测定，色谱柱为ACE Excel C18-AR（4.6 mm×150 mm，3 µm），以磷酸二氢钾缓冲液（pH 2.5）为流动相A，乙腈为流动相B，按表2进行梯度洗脱，流速0.9 mL/min，检测波长225 nm。系统适用性实验中杂质Ⅰ、杂质Ⅱ、法维拉韦、杂质Ⅲ、杂质Ⅳ和杂质Ⅴ依次出峰，理论板数分别为12 495、 8 364、26 990、 88 423、117 055、49 596，杂质Ⅰ~Ⅴ的相对保留时间分别为0.28、0.43、1.27、1.43、1.48，法维拉韦与相邻杂质的分离度分别为26.2和11.6。检出限0.04％，定量限0.12％。供试品溶液的质量浓度为0.5 mg/mL，自身对照溶液浓度为2.5 μg/mL，进样体积为20 μL，记录45 min内的色谱图，见图5。采用峰面积归一化法与自身对照法计算杂质含量，待标品中未检出杂质，HPLC纯度为100%。

2.2 质量分析

2.2.1 有关物质

采用高效液相色谱法（HPLC）测定，色谱柱为ACE Excel C18-AR（4.6 mm×150 mm，3 µm），以磷酸二氢钾缓冲液（pH 2.5）为流动相A，乙腈为流动相B，按表2进行梯度洗脱，流速0.9 mL/min，检测波长225 nm。系统适用性实验中杂质Ⅰ、杂质Ⅱ、法维拉韦、杂质Ⅲ、杂质Ⅳ和杂质Ⅴ依次出峰，理论板数分别为12 495、 8 364、26 990、 88 423、117 055、49 596，杂质Ⅰ~Ⅴ的相对保留时间分别为0.28、0.43、1.27、1.43、1.48，法维拉韦与相邻杂质的分离度分别为26.2和11.6。检出限0.04％，定量限0.12％。供试品溶液的质量浓度为0.5 mg/mL，自身对照溶液浓度为2.5 μg/mL，进样体积为20 μL，记录45 min内的色谱图，见图5。采用峰面积归一化法与自身对照法计算杂质含量，待标品中未检出杂质，HPLC纯度为100%。

2.2.3 水分

按《中国药典》2020年版四部通则0832水分测定法第一法1（容量滴定法），取待标品约100 mg，精密称定，置于水分测定仪中，测定水分含量为0.15％（n=5）。

2.2.4 动态蒸气吸附

温度25℃，氮气体积流量200 mL/min，相对湿度以10%的变化步进，从20%逐渐增加到80%，之后再逐渐降低到20%，dm/dt模式，即达到平衡后自动进入下个湿度。设定自动测定样品质量时间间隔为5 s，自动记录样品质量时间间隔为1 min。法维拉韦的水分吸附动力学曲线见图7，随着环境相对湿度由低到高又由高到低的整个过程，法维拉韦相对质量变化始终小于0.1％，说明待标品不具引湿性，暴露在一定湿度环境中时既不会吸水又不会脱水。

2.2.3 水分

按《中国药典》2020年版四部通则0832水分测定法第一法1（容量滴定法），取待标品约100 mg，精密称定，置于水分测定仪中，测定水分含量为0.15％（n=5）。

2.2.4 动态蒸气吸附

温度25℃，氮气体积流量200 mL/min，相对湿度以10%的变化步进，从20%逐渐增加到80%，之后再逐渐降低到20%，dm/dt模式，即达到平衡后自动进入下个湿度。设定自动测定样品质量时间间隔为5 s，自动记录样品质量时间间隔为1 min。法维拉韦的水分吸附动力学曲线见图7，随着环境相对湿度由低到高又由高到低的整个过程，法维拉韦相对质量变化始终小于0.1％，说明待标品不具引湿性，暴露在一定湿度环境中时既不会吸水又不会脱水。

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